Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Oct-4 dan Klf4 merupakan dua gen penyandi pluripotensi yang terdapat pada manusia. Kedua gen tersebut dapat dideteksi pada mRNA sel kanker manusia dengan menggunakan rancangan primer spesifik pada metode RT-PCR. Proses RT-PCR akan mengubah mRNA menjadi cDNA yang kemudian hasilnya dilakukan purifikasi dari gel agarosa. Hasil purifikasi gel agarosa diamplifikasi dengan PCR. Selanjutnya, dilakukan proses sekuensing untuk memeriksa keakuratan sekuen gen yang nantinya akan dikloning. Hasil sekuensing dianalisis dengan BLASTN untuk pencarian homologi pada database asam nukleat. Ligasi dilakukan menggunakan vektor pET101/D-TOPO®. Rancangan primer yang spesifik dan penambahan basa CACC ATG pada primer forward merupakan syarat untuk melakukan ligasi DNA ke vektor pET101/D-TOPO®, dimana proses ligasi ini tidak menggunakan enzim ligase. Selanjutnya, produk hasil ligasi ditransformasi ke inang Escherichia coli DH5α yang selnya sudah dibuat kompeten dengan metode heat shock. Koloni yang tumbuh di media LB agar dengan ampisilin diisolasi untuk mendapatkan plasmid yang selanjutnya dianalisis dengan menggunakan teknik PCR. Vektor plasmid yang terdapat pada E.coli DH5α kompeten mengandung sisipan gen Oct-4 dan Klf4.

---

Oct-4 and Klf4 are two genes coding of pluripotency in human. Both of the genes can be detected in human cancer cell mRNA by using specifically designed primers in RT-PCR method. RT-PCR process changed the mRNA into cDNA. The result from this process was purified from agarose gel fragment and amplified by PCR method. Then, sequencing of the purified products were done and analyzed using BLASTN feature in NCBI site to search the homology of the sequence compared to the sequences in nucleic acid database. The vector used in ligation process was pET101/D-TOPO® vector. Specifically designed primers and adding CACC ATG base in the beginning of forward primer are the requirements of using this vector. The ligation process using this TOPO® vector does not require the presence of DNA ligase. The next process is transformation by using the heat shock method. Ligation product is transformed into competent Escherichia coli DH5α host. Colonies that grows in LB agar media with ampicillin are treated by plasmid isolation protocol in order getting the plasmids for further anlysis using PCR method. The result from PCR analysis shows that the plasmids in competent E.coli DH5α contain Oct-4 and Klf4 inserts.

Abstrak :
ABSTRAK
Penemuan akan sel pluripoten pada kulit prepusium, yang sebelumnya dibuang, menunjukan bahwa kulit prepusium dapat dijadikan sumber untuk bank sel punca yang dapat bermanfaat bagi donor dan keluarganya. Dalam transportasi jaringan ke bank, kami ingin melihat metode yang lebih sederhana dan murah dengan menggunakan biang es dan es dibandingkan dengan nitrogen cair untuk memelihara sel-sel punca. Kulit-kulit prepusium diperoleh dari sirkumsisi masal dengan persetujuan dari para subjek dan dikirim dengan menggunakan biang es atau es. Di laboratorium, sampel kulit diproses dengan teknik histologi, pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE), dan Imunohistokimia (IHK) menggunakan antibodi Oct-4. Data hasil percobaan dianalisis dengan mikroskop, OptiLab?, Image Raster?, dan SPSS. Ekspresi positif dari Oct-4 dihitung dan dianalisis dengan SPSS. Rata-rata dari ekspresi positif Oct-4 adalah 2.30 pada sampel yang dikirim dengan menggunakan biang es, dan 2.38 pada es. Hasil dari percobaan kami menunjukkan tidak ditemukannya perbedaan yang berarti antara biang es dan es (nilai P adalah 0.091). Dengan demikian, biang es dan es memiliki fungsi yang sama sebagai metode transportasi dingin untuk kulit prepusium dan dapat digunakan sebagai jembatan menuju pembekuan dengan nitrogen cair

---

ABSTRACT
The discovery of pluripotent cells in preputial skin, a previously discarded tissue, means prepuce can become a new source of stem cell banking which can be beneficial for the donor and his family. In transporting preputial skin to the biobank, we wanted to see simpler and inexpensive cold transport methods using dry ice and ice rather than liquid nitrogen to preserve the stem cells. The preputial skins were obtained from mass circumcision with informed consent and transported into the laboratory with dry ice or ice. In the laboratory, the skin samples underwent histotechnique process, Hematoxylin-Eosin (HE) staining, and Immunohistochemistry (IHC) with Oct-4 antibody staining. The data was analyzed using microscope, OptiLab?, Image Raster?, and SPSS. Oct-4 positive expression was counted and the data was examined with SPSS. The mean of Oct- 4 expression in samples transported with dry ice was 2.30 and ice was 2.38. Our study resulted in no significant difference between dry ice and ice (P value is 0.901) in the Oct-4 expression. Thus, dry ice and ice have equal function as cold transport method for preputial skin and can be used as a bridge towards liquid nitrogen freezing.

Abstrak :
ABSTRAK
Studi tentang sel punca pluripoten di preputium adalah salah satu topik yangbelum banyak dilakukan namun sedang berkembang. Beberapa penanda sepertipenanda pluripotensi oct-4 dan penanda proliferasi ki-67 telah dilaporkankeberadaannya di preputium. Untuk menumbuhkan sel punca tersebut, teknikisolasi dan kultur yang baik perlu dilakukan. Pengertian lebih dalam mengenai selpunca di preputium dapa tmembuka kemungkinan baru dalam terapi rekonstruksikulit seperti cangkok kulit. Tujuan riset ini adalah untuk melakukan penetapanmetode awal isolasi dan kultur sel dermis dan hipodermis preputium danmengidentifikasi sel positif oct-4 dan ki-67.Dermis dan hipodermis diisolasi dan dikultur di 12-well plate dan dipindahkan ke24-well plate. Kultur diobservasi untuk identifikasi sel-sel fibroblastik. Panen seldilakukan dengan tripsinasi dan sentrifugasi. Pellet difiksasi dengan methanol dandi-mount ke preparat histologi. Preparat diproses immunositokimia denganantibodi oct-4 dan ki-67 dan diobservasi dibawah mikroskop cahaya.Pada kesimpulannya, dibutuhkan lebih banyak sel untuk analisis sel positif oct-4dan ki-67. Oleh karena itu, optimasi metode isolasi dan kultur dermis danhipodermis preputium masih diperlukan.

---

ABSTRACT
The study on pluripotent stem cell in prepuce is one of the topic on stem cell that is not yet common but rapidly developing. Several markers such as Oct 4 for pluripotency and ki 67 for proliferation have been reported in prepuce. To generate these stem cells, careful isolation and cell culture are performed. Better understanding of stem cells in prepuce can open more possibilities in skin regeneration and skin reconstruction treatment such as skin graft. This research aims to perform initial establishment method for isolation and culture of prepuce skin rsquo s dermis and hypodermis and to identify oct 4 and ki 67 positive cells from the culture derived cells.The dermis and hypodermis of prepuce were isolated and cultured in 12 well plate for 7 days and transferred into 24 well plate. The culture was observed for fibroblastic like cells. The cells were harvested using trypsinization and centrifugation. The pellets were fixated on methanol to be mounted on histological slides. Immunocytochemistry using oct 4 and ki 67 antibody were performed on the samples. The samples were observed under light microscope.Fibroblastic like cells were found in one of the culture on the 7th day. Dermis culture has more pellet of harvested cells compared to hypodermis culture. Histological slides examination revealed few number of cells and debris can be found. Oct 4 positive cells were found in dermis sample and there were no ki 67 positive cells.

Abstrak :
ABSTRAK
Sampah medis berupa prepusium sangatlah mudah di peroleh di Indonesia. Sel-sel yang di dapat dari enam sampel di duga memiliki kapasitas pluripotensi dan dapat berdiferensiasi ke lini lain untuk pengobatan secara medis. Pada experiment ini, sel keratinosit di peroleh dari epidermis prepusium, sel tersebut di ambil mengunakan larutan enzymatik dispase dan tripsin masing-masing di inkubasi semalaman dengan sampel. Kemudian sel-sel tersebut di kultur dengan DMEM tinggi glukosa untuk meningkatkan jumlah sel. Setelah di kultur, sel-sel tersebut di ambil untuk pengecekan immunositokimia (ISK) Oct-4, hal ini di karenakan Oct-4 adalah penanda kapasitas pluripotensi. Sample lainnya tetap di kultur untuk eksperimen konfluensi/differensiasi spontan selama 14 hari. Riset ini telah sukses menggunakan medium kultur alternatif dan berbiaya efektif untuk menkultur keratinosit. Bahan medium tersebut yakni; DMEM tinggi glukosa, PRP 10%, heparin 1%, FBS 10%, penstrep 1%, dan fungizone 1%. Hasil dari pada ISK tersebut adalah positif parsial dengan nukleus keratinosit yang terwarnai coklat tua pada lima lapang pandang berkekuatan tinggi dari setiap sampel. Namun, analisis diferensiais spontan menggunakan alcian blue menunjukkan hasil negative dengan tidak adanya perubahan dari lini keratinosit ke kondrosit

---

ABSTRACT
The medical waste of preputial skin is easily obtained in Indonesia. The cells isolated from six samples are expected to have pluripotency and able to differentiate to other lineage for medical treatment. This research uses the epidermal layer of preputial skin to obtain keratinocytes, this cells are taken using dispase and trypsin solution overnight respectively. Then, the keratinocytes are subsequently cultured using DMEM complete high glucose to increase the number of cells. The cultured cells are then taken for immunocytochemistry (ICC) of Oct-4, since it is the marker of pluripotency. The other half of cultured samples are continued for over confluency analysis for fourteen days to observe spontaneous differentiation. This research has successfully used an alternative and cost effective culture medium for keratinocytes. It consist of DMEM high glucose, PRP 10%, heparin 1%, FBS 10%, penstrep 1%, and fungizone 1%. The result of ICC is partially positive with keratinocytes nuclear being stained dark brown in five hpf from each sample. However, spontaneous differentiation analysis using alcian blue shows negative result of chondrogenic formation from keratinocytes