Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Ajuvan liposom penting dalam meningkatkan efektivitas kerja vaksin dan menjadi alternatif ajuvan yang menjanjikan karena memiliki kemampuan enkapsulasi tinggi dan induksi imun spesifik. Namun, rendahnya stabilitas struktur liposom menjadi tantangan utama dalam pembuatan ajuvan. Polimer polietilenimin PEI25k dapat meningkatkan dan memperkuat struktur liposom serta memiliki potensi sebagai ajuvan. Namun, PEI25k bersifat toksik. Oleh karena itu, kolesterol diformulasikan ke liposom untuk menekan tingkat toksisitas. Selain itu, lipid kationik dioleoylphosphatidylethanolamine (DOTAP) diketahui dapat meningkatkan efisiensi dan stabilitas struktur liposom. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan formula serta evaluasi kemampuan kompleks liposom PEI25k/kolesterol, PEI25k/DOTAP dan PEI25k/DOTAP/kolesterol dengan DNA (0,5:1; 1:1; 2:1; 4:1) dalam mengkondensasi dan melindungi DNA dari degradasi; toksisitas dan sifat imunostimulan liposom terhadap sel RAW 264.7; mengetahui potensi formula dalam induksi respons imunologi secara in vivo. Liposom dipreparasi dengan metode injeksi etanol dan kompleks DNA-liposom dikarakterisasi melalui uji mobilitas dan uji stabilitas. Liposom juga dievaluasi secara in vitro melalui uji MTT dan uji pelepasan nitrit oksida (NO). Selain itu, uji analisis hematologi darah mencit BALB/c dilakukan untuk mengetahui respons imun lebih lanjut. Kompleks DNAliposom dengan perbandingan 1:0,5 sampai 1:4 mampu mengkondensasi dan melindungi DNA dari degradasi enzim DNAse. Seluruh formula bersifat non-toksik pada konsentrasi 0,01 ppm-6,25 ppm dan bersifat imunostimulan pada konsentrasi 6,25 ppm dan 25 ppm. Formula PEI25k:DOTAP (1:1) memiliki tingkat viabilitas dan menginduksi pelepasan NO tertinggi. Analisis hematologi menunjukkan formula PEI25k:DOTAP:kolesterol (1:1:1) dan (2:1:1) memiliki potensi paling signifikan dalam induksi respons imun. ......Adjuvant liposome has a crucial role in enhancing the vaccine’s efficiency and has become a promising alternative due to its high encapsulation and specific immunity induction capability. However, the low stability of its structure has become the main obstacle in adjuvant manufacture. Polyethyleneimines PEI25k could increase and strengthen the structure of liposomes and also have adjuvant potential. Due to the high cytotoxicity of PEI25k, the liposomes are being formulated with cholesterol. Also, cationic lipids such as, dioleoylphosphatidylethanolamine (DOTAP) are known to enhance the efficiency and structure of liposomes. This research aims to obtain formulas and evaluate the ability of the liposome PEI25k/cholesterol, PEI25k/DOTAP, and PEI25k/DOTAP/cholesterol-DNA (0.5:1; 1:1; 2:1; 4:1) in condensing and protecting DNA from degradation; toxicity, and immunostimulant properties against RAW 264.7 cells; as well as in vivo. The liposomes are prepared by ethanol injection method. The DNA-liposome complexes are characterized by mobility and stability assays. Liposomes are also evaluated in vitro through MTT assay and nitric oxide release assay. In addition, a hematological analysis was performed to determine further immune response. The DNA-liposome complexes with a ratio of 1:0,5 to 1:4 are capable of condensing and protecting DNA from degradation. The whole formula is non-toxic at concentrations of 0.01 ppm – 6.25 ppm and immunostimulant at concentrations of 6.25 and 25 ppm. The formula PEI25k:DOTAP (1:1) has the highest level of viability and NO released. Hematological analysis indicates that the formula of PEI25K:DOTAP:cholesterol (1:1:1) and (2:1:1) has significant potential to induce an immune responses.

Abstrak :
Masih tingginya prevalensi infeksi HIV di Indonesia dan anjuran WHO untuk melakukan pengembangan vaksin HIV-1 dalam penanganan penyebaran infeksi, menjadikan pentingnya dilakukan pengembangan vaksin HIV untuk tujuan preventif maupun kuratif HIV-1 berdasarkan subtipe AE_CRF01 isolat Indonesia. MPER gp41 sebagai salah satu target dalam pengembangan vaksin HIV telah diketahui dapat menginduksi produksi antibodi netralisasi HIV terhadap MPERgp41. Namun dalam implementasinya, MPER memiliki imunogenisitas yang rendah. Pada penelitian terdahulu telah berhasil dibuat vaksin DNA HA-MPER2 yang mengandung gen HA H5N1 sebagai antigen yang akan mempresentasikan epitop MPER gp41 HIV-1. Penelitian ini dilakukan untuk membuktikan adanya respon antibodi spesifik MPER gp41 HIV-1 pada mencit BALB/c yang diimunisasi vaksin DNA HA-MPER2, kemudian dibandingkan dengan kelompok mencit yang diimunisasi vaksin DNA HA-MPER1, vaksin DNA HA dan vaksin DNA wildtype. Penelitian diawali dengan membuat sel E. coli TOP 10 kompeten, transformasi plasmid rekombinan, verifikasi hasil isolasi plasmid dengan analisa gel agarosa 0,8% dan sekuensing. Kemudian dilakukan preparasi vaksin DNA sebelum penyuntikan dengan dilarutkannya plasmid dalam PBS 1x dan ditambahkan DMRIE-c (perbandingan molar 1:2). Pengujian ELISA dilakukan terhadap serum antibodi (pengenceran 1/50) dengan menggunakan peptida ELDKWAS 12,5 μg/ml sebagai antigen. Hasil uji ELISA menunjukkan adanya respon antibodi spesifik terhadap MPER gp41 HIV-1 dengan titer antibodi dalam jumlah rendah.

---

The high prevalence of HIV infection in Indonesia and WHO recommendation to develop HIV-1 vaccine in the handling of infection spreading signifies the importance of HIV-1 vaccine development for preventive and curative purpose based on AE_CRF01 subtype of Indonesian isolate. MPER gp41 as one of the target of HIV vaccine development had been known to induce production of neutralizing antibody against HIV MPER gp41. However, in the implementation, MPER had low immunogenicity. Previous work on HIV vaccine development at IHVCB-UI had succesfully produced DNA HA-MPER2 vaccine prototype which contained HA H5N1 gen as a scaffold that would present MPER gp41 HIV-1 epitope. This research was conducted to prove the existence of specific antibody response towards HIV MPER gp41 in BALB/c mice immunized by HA-MPER2 DNA vaccine in comparison with BALB/c mice immunized by HA DNA vaccine and the pcDNA3.1 vector DNA. The research was initiated by generation of E. coli TOP 10 competent cells, followed by transformation of competent cells, and plasmid isolation. The result would be verified by 0.8% agarosa gel analysis and sequencing, followed by DNA vaccine preparation by dissolving plasmid in PBS 1x and adding DMRIE-c (molar comparation 1:2). The ELISA test was conducted towards antibody serum (dilution 1/50) by using 12.5 μg/ml ELDKWAS peptide as an antigen. The result showed the presence of specific antibody response towards HIV MPER (ELDKWAS) gp41 that was observed in low titer.