Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
ELISA merupakan metode alternatif untuk mendeteksi residu tetrasiklin pada produk hewan. Síntesis imunogen tetrasiklin dan produksi antibodi anti tetrasiklin merupakan dua tahapan penting yang harus dilakukan jika ingin melakukan analisis residu tetrasiklin dengan metode ELISA. Metode tolidin dan metode NCS dapat digunakan untuk mensintesis imunogen tetrasiklin. Imunogen TC-Tolidin-BSA berwarna ungu dan menyerap pada dua λ maks yaitu 277 nm dan 491 nm, sedangkan imunogen TC-NCS-BSA berwarna kuning kecoklatan dan menyerap pada dua λ maks yaitu 278 nm dan 322 nm. Hasil KLT dan HPLC menunjukan bahwa kedua imunogen yang dihasilkan cukup murni. Dari hasil SDS-PAGE dapat diperkirakan BM dari TC-Tolidin-BSA adalah sebesar 71.219 Da sedangkan BM TC-NCS-BSA sebesar 70.501 Da. Nilai BM dari kedua imunogen tetrasiklin lebih besar dibandingkan BM dari BSA (berbanding terbalik dengan Rf), hal ini menunjukkan bahwa imunogen sudah terbentuk. Produksi antibodi anti tetrasiklin dilakukan dengan cara imunisasi imunogen TC-Tolidin-BSA dan TC-NCS-BSA pada perbandingan 1:75 terhadap kelinci white New Zealand berkelamin jantan. Purifikasi antibodi dilakukan dengan protein A sepharose yang spesifik mengikat IgG. Konsentrasi IgG tertinggi dari kedua imunogen terdapat pada fraksi 1, yaitu sebesar 10.93 mg/mL untuk imunogen TC-Tolidin-BSA dan 10.61 mg/ mLuntuk TC-NCS-BSA. Hasil SDS-PAGE terhadap antibodi menunjukkan bahwa IgG terurai menjadi 2 pita (rantai ringan dan rantai berat).

---

ELISA is an alternative method for detecting tetracycline residues in animal products. This method has been known as rapid, sensitive, specific, and cost-effective analysis. Synthesis of tetracycline immunogen and production of anti-tetracycline antibody are two important steps which must be done if we like to analysis of tetracycline residues with ELISA. Tolidine and NCS methods applicable to synthesis of tetracycline immunogens. Tolidine method produce a purple immunogen (TC-Tolidine-BSA) and absorb at two maximum wavelength (277 nm and 491 nm), while NCS method produce a yellowish-brown immunogen (TC-NCS-BSA) and absorb at two maximum wavelength (278 nm and 322 nm). TLC and HPLC result show that both of immunogens have good purity because have not contain free tetracycline and residue of reagent. From result of SDS-PAGE can be estimated molecular weight (MW) of TC-TOLIDINBSA equal to 71.219 Da while MW of TC-NCS-BSA equal to 70.501 Da. The value of MW from both of immunogens is higher than BSA (smaller Rf), this fact indicate that immunogen have been formed. Anti-tetracycline antibody produced by immunizing of immunogens at comparison of the same concentration BSA and Tetrasiklin ( 1:75) to male white New Zealand rabbit. The antibody purified by protein A sepharose that specific coating IgG. The highest concentration of IgG from both immunogen list on fraction 1 (10.93 mg/mL for TC-Tolidin-BSA dan 10.61 mg/ mL for TC-NCS-BSA). SDS-PAGE result show that IgG has been divided into two band (heavy chains and light chains).

Abstrak :
Sejak September 2008, ketika isu kontaminasi melamin diketahui secara luas, telah menjadi perhatian kesehatan internasional untuk memenuhi kebutuhan pemantauan cepat dan akurat deteksi melamin dalam sampel susu. Suatu metode indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) dengan spesifisitas yang tinggi dikembangkan untuk deteksi melamin dalam susu. Sintesis hapten dan pembentukan konjugat hapten-protein dilakukan sebagai immunogen untuk membentuk antibodi yang selektif terhadap melamin. Hapten melamin disintesis dengan mereaksikan asam gamma-amino butirat (GABA) dengan 2- kloro-4,6-diamino-1,3,5-triazin (CAAT). Digunakan disikloheksilkarbodiimida (DCC) dan N-hidroksisuksinimida (NHS) untuk merubah gugus karboksilat hapten menjadi ester aktif sehingga dapat dikonjugasikan ke bouvine serum albumin (BSA). Hapten asam 4-(4,6-diamino-1,3,5-triazin-2-ylamino)-butanoat berhasil disintesis dengan yield 8,16%, dan serapan maksimum UV pada panjang gelombang 233 nm. Karakterisasi hapten menunjukkan adanya serapan inframerah gugus amina sekunder pada bilangan gelombang 1654,92 cm-1 dan spektrum mass spectroscopy pada m/z 212,4 yang menunjukkan massa relatif hapten (C7H12N6O2). Konjugat hapten-BSA menunjukkan serapan UV maksimum pada panjang gelombang 215 nm. Hasil karakterisasi menunjukkan hapten dan konjugat hapten-BSA telah berhasil disintesis. Dua plat coating antigen dipersiapkan menggunakan kopling antara hapten dengan ovalbumin (OVA). Hasil penelitian menunjukkan bahwa antibodi poliklonal dengan titer yang tinggi berhasil diproduksi dan dapat dideteksi menggunakan uji AGPT dan metode icELISA, hasilnya menunjukkan bahwa antibodi yang terbentuk mempunyai spesifisitas yang tinggi untuk deteksi melamin.

---

Since September 2008, when the current melamine contamination incident became widely known, have become an international health event to meet the need for rapid and reliable monitoring of melamine in milk samples. An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) with enhanced specificity for melamine in milk was developed. Hapten and hapten-protein conjugate were prepared as immunogen of antibody production for melamine assay. Hapten was synthesized by reacting gamma amino butyric acid and 2- chloro-4,6-diamino-1,3,5-triazine (CAAT). Dicyclohexylcarbodiimide (DCC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) were used to alter carboxylic group of hapten into active ester goup, which made it possible to be conjugated to bovine serum albumin (BSA). Hapten 4-(4,6-diamino-1,3,5-triazine-2-ylamino) butanoic acid was successfully synthesized with 8.16% yield and 233 nm maximum wavelength of UV absorption. Characterization of hapten showed the infrared vibrational spectrum of secondary amine at 1654.92 cm-1 and mass spectrum (MS) m/z 212.4 refers to hapten (C7H12N6O2). The hapten-BSA conjugate showed UV absorption at maximum wavelength of 216 nm. These results indicated that hapten and conjugate were successfully synthesized. Two plate coating antigens were prepared by coupling both haptens to egg ovalbumin (OVA). The results showed that polyclonal antibodies with high titers were successfully production and can be detection use AGPT test and icELISA method, the result showed that a high specificity of antibody for detection melamine.