Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Hubungan infeksi fungi pada penderita asma ditemukan pada sekitar satu per tiga kasus asma. Spesies yang paling umum menyerang saluran pernapasan adalah Aspergillus fumigatus, diikuti oleh A. flavus, A. niger, dan A. terreus. Metode identifikasi yang dapat dilakukan adalah identifikasi molekuler, namun, standar identifikasi fungi pada sampel klinis belum ditetapkan. Gen calmodulin (CaM) direkomendasikan sebagai barcode untuk identifikasi fungi pada genus Aspergillus karena kemampuan membedakan antarspesies yang tinggi. Pada penelitian ini, kemampuan CaM sebagai DNA barcode Aspergillus spp. dan kandidat diagnosis molekuler aspergillosis dianalisis dengan melakukan identifikasi spesies dan analisis variasi sekuens CaM pada isolat klinis asma. Metode yang dilakukan adalah kultur isolat menggunakan sabouraud dextrose agar (SDA) dan sabouraud dextrose broth (SDB), ekstraksi DNA menggunakan phenol chloroform isoamyl alcohol (PCI), amplifikasi CaM, visualisasi menggunakan elektroforesis, sekuensing, dan analisis sekuens. Hasil penelitian menunjukkan bahwa CaM dapat mengidentifikasi 13 isolat. Gen CaM juga berhasil membedakan A. niger dan A. welwitschiae yang memiliki kemiripan genetik tinggi. Multiple alignment dari sekuens isolat menunjukkan variasi yang tinggi dengan persentase kemiripan antarspesies Aspergillus sebesar 55—65,5% dan 79,2—86,4% khusus untuk kemiripan antarspesies kelompok Nigri. Tingkat diskriminasi CaM pada genus Aspergillus juga mendukung potensi sebagai kandidat diagnosis molekuler fungal asthma atau aspergillosis secara umum.

---

Fungal infection on asthmatic patients is found about one third of asthma cases. The main species infecting respiratory organs is Aspergillus fumigatus, followed by A. flavus, A. niger, and A. terreus. Fungal on clinical isolate can be identified through molecular identification, however, there is no standardized method. Calmodulin gene (CaM) is a barcode recommended for Aspergillus identification because of its ability to differentiate between species. In this research, CaM ability as DNA barcode and candidate for aspergillosis molecular diagnosis is analyzed through species identification and CaM sequence variation analysis on clinical isolate derived from asthmatic patients. The procedures include isolate culture using sabouraud dextrose agar (SDA) and broth (SDB), DNA extraction using phenol chloroform isoamyl alcohol (PCI), CaM amplification, visualization using electrophoresis, sequencing, and sequence analysis. Results show that CaM is able to identify all of 13 isolates. CaM is also able to differentiate A. niger and A welwitschiae that have high genetic similarity. Multiple alignment of isolate sequence shows high variation with interspecies similarity of 55—65,5% and 79,2—86,4% for interspecies similarity of Nigri section. Discriminate level of CaM on the genus Aspergillus also promotes the potential as a candidate for molecular diagnosis of fungal asthma or aspergillosis."

"Penelitian bertujuan mengetahui keanekaragaman bakteri Ktedonobacteria dari sampel tanah hutan di sekitar Geiser Cisolok, Jawa Barat dengan metode culture-dependent dan metode culture-independent. Isolasi bakteri menggunakan medium Reasoner's 2A (10%) dengan penambahan 2% gellan gum, cycloheximide, dan sodium azide. Inkubasi dilakukan pada suhu 30 oC selama 3 minggu. Amplifikasi gen 16S rRNA isolat bakteri menggunakan primer spesifik Ktedonobacteria (primer 161F dan 941R), dan primer universal bakteri (9F dan 1510R). Identitas isolat bakteri diperoleh berdasarkan data full sequence gen 16S rRNA melalui pencarian homologi pada EZBioCloud (www.ezbiocloud.net). Analisis filogenetik menggunakan metode Neighbour Joining, Maximum Evolution, dan Maximum Likelihood. Analisis keanekaragaman bakteri Ktedonobacteria menggunakan Next Generation Sequencing berdasarkan data partial sequence (daerah variabel V1--V3) dari gen 16S rRNA. Analisis data komposisi taksonomi bakteri dan indeks keanekaragaman menggunakan software QIIME2. Empat isolat Ktedonobacteria dengan kode K17-1, K17-2, K42, dan K44 berhasil diperoleh. Analisis filogenetik menunjukkan bahwa keseluruhan isolat merupakan anggota kelas Ktedonobacteria dan berada dalam satu grup dengan type strain Dictyobacter aurantiacus S-27T. Namun demikian, persentase homologi sequence gen 16S rRNA keempat isolat menunjukkan nilai yang rendah terhadap type strain Dictyobacter aurantiacus S-27T, yaitu 97.16 -- 98.02%. Berdasarkan nilai tersebut, keempat isolat yang diperoleh diduga merupakan spesies baru. Hasil analisis dengan software QIIME2 menunjukkan bahwa sampel tanah yang digunakan memiliki nilai indeks keanekaragaman bakteri yang tinggi, dengan nilai sebagai berikut: 6,49 (Shannon-Winner); 0,98 (Simpson); 177 (Chao1); dan 117 (Ace). Filum Acidobacteria, Proteobacteria dan Bacteriodetes, merupakan tiga filum dengan persentase paling besar pada sampel tanah, dengan nilai persentase masing-masing 44%, 25%, dan 9%. Kelas Ktedonobacteria pada filum Chloroflexi memiliki persentase yang sangat rendah, yaitu 1,89%. Namun demikian, analisis filogenetik data amplikon (culture-independent) menunjukkan bahwa Ktedonobacteria yang terdapat pada sampel tanah tersebar dalam 5 grup, yang seluruhnya mengindikasikan taksa baru. Penelitian ini menunjukkan bahwa metode culture-dependent hanya berhasil menemukan satu dari lima grup Ktedonobacteria yang berhasil dideteksi menggunakan metode culture-independent.

---

The study aims to determine the diversity of Ktedonobacteria from forest soil samples around the Cisolok Geiser, West Java with culture-dependent and culture-independent methods. Bacterial isolation using Reasoner's 2A (10%) medium with 2% gellan gum, cycloheximide, and sodium azide. Incubation was carried out at 30 oC for three weeks. Amplification of 16S rRNA gene of bacterial isolates performed using Ktedonobacteria specific primers (primers 161F and 941R), and universal bacterial primers (9F and 1510R). The identity of bacterial isolates was obtained based on full 16S rRNA gene sequence data through a homology search on EZBioCloud (www.ezbiocloud.net). The phylogenetic analysis was performed by Neighbor-Joining, Maximum Evolution, and Maximum Likelihood methods. Analysis of Ktedonobacteria diversity using Next-Generation Sequencing based on partial sequence data (variable regions V1 -- V3) of the 16S rRNA gene. Analysis of bacterial taxonomy composition data and diversity index was conducted using QIIME2 software. Four isolates of Ktedonobacteria, namely K17-1, K17-2, K42, and K44, were successfully obtained. Phylogenetic analysis showed that all isolates were members of the class Ktedonobacteria and were in the same group as Dictyobacter aurantiacus S-27T. However, the percentage of homology of the 16S rRNA gene sequence of the four isolates showed a low value on the type strain of Dictyobacter aurantiacus S-27T, which accounted for 97.16 -- 98.02%. Based on these values, the four isolates obtained probably belonged to the new species. The results of the analysis with QIIME2 software showed that the soil samples had high bacterial diversity index values, with the following values: 6,49 (Shannon-Winner); 0,98 (Simpson); 177 (Chao1); and 117 (Ace). Phylum Acidobacteria, Proteobacteria, and Bacteriodetes are the three phyla with the largest percentage in soil samples, with percentage values of 44%, 25%, and 9%, respectively. Whereas the class Ktedonobacteria in the phylum Chloroflexi has a very low percentage, which is 1.89%. However, phylogenetic analysis of the amplicon data (culture-independent) showed that Ktedonobacteria found in soil samples distributed into five groups, indicating new taxa. In this study, culture-dependent methods found only one of the five groups of Ktedonobacteria that detected using the culture-independent method."