Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Transfeksi merupakan metode penghantaran gen menggunakan vektor nonviral dalam terapi genetika. Kitosan merupakan senyawa alami polimer kationik yang dapat membentuk ikatan ionik dengan molekul DNA yang merupakan polimer anionik sehingga dapat digunakan sebagai penghantar materi genetik. Pada penelitian ini kitosan digunakan sebagai agen penghantar gen pengkode Green Fluorescence Protein (GFP) dari plasmid pCSII-EF-AcGFP yang ditransfeksikan pada sel primer peritoneal, sel splenosit, serta galur sel HEK293T. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui kemampuan kitosan dalam mengompleks dan melindungi DNA terhadap degradasi enzim DNAse. Selain itu, uji transfeksi dan uji sitotoksisitas kitosan dilakukan untuk mengetahui sifat dan kemampuan kitosan sebagai agen penghantar pada sel peritoneal, sel splenosit, dan galur sel HEK293T. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kitosan mampu mengompleks dan melindungi DNA terhadap degradasi enzim DNAse. Hasil uji sitotoksik menggunakan MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide) terhadap sel peritoneal, sel splenosit, dan galur sel HEK293T relatif tidak toksik, pada konsentrasi kitosan 8 g/L menunjukkan viabilitas sel berturut-turut sebesar 64% (sel peritoneal), 80% (sel splenosit), dan 70% (galur sel HEK293T). Kitosan secara kualitatif dapat memfasilitasi ekspresi gen pengkode Green Fluorescent Protein (GFP) pada galur sel HEK293T, meskipun intensitas ekspresi gen GFP tidak lebih terang daripada agen transfeksi komersil Lipofectamine® 3000. Akan tetapi, pembanding Lipofectamine maupun kitosan belum berhasil memfasilitasi ekspresi gen GFP yang ditunjukkan dengan tidak adanya pendaran cahaya pada sel peritoneal dan sel splenosit meskipun rasio perbandingan massa kitosan dan Lipofectamine telah ditingkatkan dari 1:2 menjadi 1:4 selama inkubasi 2x24 jam. Modifikasi struktur atau formulasi kitosan yang tepat diperlukan untuk meningkatkan kemampuan senyawa kitosan dalam memfasilitasi ekspresi gen GFP pengkode plasmid pCSII-EF-AcGFP ke dalam sel peritoneal dan splenosit. ......Transfection is a gene delivery method using nonviral vectors in genetic therapy. Chitosan is a natural cationic polymer compound that can form ionic bonds with DNA molecules which are anionic polymers so that it can be used as a conductor of genetic material. In this study, chitosan was used as a delivery agent for the gene encoding Green Fluorescence Protein (GFP) from the pCSII-EF-AcGFP plasmid which was transfected on peritoneal primary cells, splenocytes, and HEK293T cell lines. The purpose of this study was to determine the ability of chitosan to form complexes and protect DNA against DNAse enzyme degradation. In addition, chitosan transfection and cytotoxicity tests were carried out to determine the nature and ability of chitosan as a conducting agent in peritoneal cells, splenocytes, and HEK293T cell lines. The results showed that chitosan was able to complex and protect DNA against DNAse enzyme degradation. The results of the cytotoxic test using MTT (3[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide) against peritoneal cells, splenocytes, and HEK293T cell lines were relatively non-toxic, at a concentration of 8 g/L chitosan showed cell viability was 64% (peritoneal cells), 80% (splenocyte cells), and 70% (HEK293T cell line). Chitosan can qualitatively facilitate the expression of the gene encoding Green Fluorescent Protein (GFP) in the HEK293T cell line, although the intensity of GFP not brighter than that of the commercial transfection agent Lipofectamine® 3000. However, neither Lipofectamine nor chitosan comparisons have been GFP showing the absence of light luminescence in peritoneal cells and splenocytes cells although the ratio of mass ratio of chitosan and Lipofectamine has been increased from 1:2 to 1:4 during 2x24 hours incubation. Modification of the structure or proper formulation of chitosan is needed to increase the ability of chitosan compounds to facilitate the expression of the GFP encoding the plasmid pCSII-EF-AcGFP into peritoneal cells and splenocytes.

Abstrak :
ABSTRACT
Stres oksidatif merupakan kondisi dimana terjadi ketidakseimbangan antara jumlah radikal bebas yang menyerang tubuh dengan jumlah antioksidan sebagai mekanisme pertahanan tubuh. Stres oksidatif akan menyerang molekul biologis seperti lipid, protein, dan DNA sehingga memicu penyakit neurodegeneratif dan penyakit parah lainnya. Radiasi UV dari matahari menjadi salah satu faktor penyumbang terbesar terjadinya stres oksidatif. Di sisi lain, ditemukan fakta bahwa di dalam propolis ditemukan sifat antioksidan yang merupakan mekanisme pertahanan melawan stres oksidatif. Oleh karena itu, penulis melakukan penelitian tentang efek proteksi propolis wax dari lebah jenis Tetragonula sp terhadap sel yang dipapar radiasi UV. Sel yang digunakan adalah HEK293T dan Fibroblas cell line dimana dilakukan 4 uji untuk mengklarifikasi hipotesis yang dibuat: uji proliferasi sel dengan pengukuran absorbansi warna yang dihasilkan oleh WST-8; uji viabilitas sel dengan pengamatan melalui mikroskop fluoresens pada sel yang diwarnai dengan Hoechst dan PI, uji LDH/apoptosis sel dengan pengukuran absorbansi warna yang dihasilkan oleh WST-8, dan uji jumlah radikal bebas yang diproduksi sel dengan mengukur intensitas fluoresens yang dihasilkan oleh diklorofloresen. Variabel bebas yang digunakan adalah konsentrasi propolis wax. Penulis juga menganalisis senyawa yang terkandung dalam propolis wax menggunakan metode LC-MS. Hasil yang didapat sesuai dengan hipotesis yang dibuat dimana dari keempat uji yang dilakukan didapati sifat proteksi propolis wax terhadap sel yang terpapar radiasi UV namun pada range konsentrasi propolis yang lebih besar memiliki kecenderungan memberikan efek toksik ke sel. Sedangkan pada hasil LC-MS didapat sekitar 85 senyawa dimana 35 diantaranya merupakan senyawa turunan flavonoid dan polifenol sehingga memiliki sifat antioksidan. Selain itu, juga ditemukan 5 senyawa yang dapat menyebabkan apoptosis pada sel. Kesimpulannya, propolis wax dapat digunakan sebagai alternatif pengobatan stres oksidatif dan penyakit yang terkait dengannya di masa mendatang serta perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk menentukan konsentrasi optimum propolis sehingga tidak menyebabkan efek toksik ke sel.

---

ABSTRACT
Oxidative stress is a condition where there is imbalance condition between the number of free radicals that attack the body with the number of antioxidants as the body 39 s defensive mechanism. Oxidative stress will attack biological molecules such as lipids, proteins, and DNA that trigger neurodegenerative diseases and other severe diseases. UV radiation from the sun is one of the biggest contributing factors of oxidative stress. On the other hand, it was found antioxidant properties in propolis that can be used as a defense mechanism against oxidative stress. Therefore, the authors conducted a study on the effect of propolis wax protection from Tetragonula sp bees to cells exposed to UV radiation. Cells used were HEK293T and Fibroblast cell line where 4 tests were performed to clarify the hypothesis made cell proliferation test with color absorbance measurements produced by WST 8 the cell viability test by observation through a fluorescence microscope on cells stained with Hoechst and PI LDH apoptotic cell test with color absorbance measurements produced by WST 8, and free radicals produced on cells test by measuring the intensity of fluorescence produced by dichlorofluorescent. The independent variable used is propolis wax concentration. The author also analyzed the components contained in propolis wax using the LC MS method. The results obtained in accordance with the hypothesis that is made of the four tests conducted to find the nature of propolis wax protection against cells exposed to UV radiation but in the greater concentration range of propolis has a tendency to give toxic effects to cells. While on the results of LC MS obtained about 85 compounds in which 35 of them are compounds derived flavonoids and polyphenols that have antioxidant properties. In addition, also found 5 compounds that can cause apoptosis in cells. In conclusion, propolis wax can be used as an alternative treatment of oxidative stress and related diseases in the future and further research is needed to determine the optimum concentration of propolis to prevent from cells toxicity.