Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Latar Belakang: Prevalensi obesitas dan overweight yang tinggi baik di Indonesia maupun global menjadi masalah yang perlu di waspadai karena dapat mengarah kepada penyakit metabolik lainnya. Respon adaptasi sel terhadap perubahan pH ekstraseluler (pHe) perlu dipertahankan untuk dapat menjalankan fungsi normal sel. Kondisi obesitas dan asidifikasi pHe dapat menyebabkan perubahan fisiologi seluler dan menyebabkan dampak negatif seperti penyakit metabolik. Penelitian ini akan menganalisis dampak dari asidifikasi ekstraseluler sel mononuklear darah tepi pada orang dewasa muda dengan IMT>23 terhadap viabilitas sel, kadar superoksida, dan peroksida melihat studi in vitro tentang respon adaptasi sel terhadap asidifikasi pHe masih terbatas. Metode: Sampel darah diambil dan dilakukan isolasi SMDT. SMDT kemudian dikultur pada berbagai pH medium yang diatur menjadi 7,4; 7,0; dan 6,6 selama 72 jam. Tingkat keasaman medium kultur diatur menggunakan 0,01 M asam klorida (HCl) dan 0,01 M natrium hidroksida (NaOH) yang diukur dengan pH meter dan medium kultur diganti setiap 24 jam. Setelah dikultur, sel di harvest dan diberikan perlakuan untuk masingmasing parameter. Viabilitas sel merupakan perbandingan jumlah sel hidup setelah dan sebelum dikultur dengan jumlah sel/ml dihitung menggunakan metode eksklusi trypan blue, kadar superoksida diukur dengan menggunakan dihydroethidium (DHE) probe, dan kadar hidrogen peroksida menggunakan 2’-7’-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) probe. Nilai perubahan pH ekstraseluler (ΔpHe) juga dihitung setelah kultur asidifikasi selama 72 jam untuk melihat respon adaptasi sel. Hasil: Terjadi peningkatan ΔpHe setelah kultur asidifikasi ekstraseluler di setiap kelompok pH setelah 72 jam. Tidak terdapat perbedaan persentase viabilitas sel setelah kultur asidifikasi 72 jam pada setiap kelompok pH serta didapatkan kadar superoksida yang meningkat seiring penurunan pH baik pada pH 7,0 maupun 6,6 sementara tidak terdapat perbedaan kadar hidrogen peroksida yang signifikan pada setiap kelompok pH. Kesimpulan: SMDT menunjukkan nilai perubahan pH ekstrasel yang masih baik saatdiberi perlakuan asidifikasi ekstraseluler, tetapi terjadi peningakatan rerata kadarsuperoksida yang signifikan dan tidak terdapat perbedaan rerata kadar hidrogen peroksidaserta viabilitas sel yang signifikan.

---

Introduction: The high prevalence of obesity and overweight in Indonesia and globally is a problem that needs to be watched out for because it can lead to other metabolic diseases. The cell adaptation response to changes in extracellular pH (pHe) needs to be maintained to be able to carry out normal cell functions. Obesity and pHe acidification can cause changes in cellular physiology and cause negative impacts such as metabolic diseases. This study will analyze the impact of extracellular acidification of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in young adults with BMI> 23 on cell superoxide and peroxides levels considering that in vitro studies of cell adaptation responses to pHe acidification are still limited. Methods: Blood samples were taken and SMDT was isolated. SMDT was then cultured at various pH media adjusted to 7.4; 7.0; and 6.6 for 72 hours. The acidity level of the culture medium was adjusted using 0.01 M hydrochloric acid (HCl) and 0.01 M sodium hydroxide (NaOH) measured with a pH meter and the culture medium was replaced every 24 hours. After culture, the cells were harvested and given treatment for each parameter. Cell viability is the ratio of the number of living cells after and before culture with the number of cells/ml calculated using the trypan blue exclusion method, superoxide levels were measured using a dihydroethidium (DHE) probe, and hydrogen peroxide levels using a 2’-7’-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) probe. The value of extracellular pH changes (ΔpHe) was also calculated after acidification culture for 72 hours to see the cell adaptation response. Results: There was an increase in ΔpHe after extracellular acidification culture in each pH group after 72 hours. There was no difference in the percentage of cell viability after 72 hours of acidification culture in each pH group and superoxide levels increased with decreasing pH at both pH 7.0 and 6.6 while there was no significant difference in hydrogen peroxide levels in each pH group. Conclusion: PBMC showed a fairly good homeostatic response when treated with extracellular acidification, but there was a significant increase in the average superoxide levels and there was no significant difference in the average hydrogen peroxide levels and viability."

"Latar BelakangPenyakit degeneratif merupakan salah satu masalah kesehatan yang krusial dan memerlukan perhatian serius. Salah satu faktor risiko yang turut berkontribusi terhadap perkembangan penyakit degeneratif adalah obesitas. Pada kondisi obesitas, terjadi perubahan fisiologis yang dapat memengaruhi respons adaptasi seluler, termasuk terhadap asidifikasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh asidifikasi ekstraseluler terhadap ekspresi mRNA HIF-1α sebagai respons adaptasi pada sel mononuklear darah tepi (SMDT) orang dewasa muda dengan IMT>23.MetodeSel mononuklear darah tepi (SMDT) diisolasi lalu dikultur pada berbagai pH medium. Pengaturan pH medium dilakukan dengan penambahan larutan asam klorida (HCl) 0,01M. Sel-sel tersebut diinkubasi selama 72 jam, dengan penggantian medium kultur dilakukan setiap 24 jam. Perubahan pH ekstraseluler diukur menggunakan pH meter. Viabilitas sel juga dihitung menggunakan metode trypan blue. Selanjutnya, dilakukan isolasi RNA dari sel yang telah di-harvest. Ekspresi relatif mRNA HIF-1α dianalisis menggunakan metode Livak berdasarkan nilai CT pada qRT-PCR.HasilTidak ditemukan perbedaan ekspresi mRNA HIF-1α yang signifikan pada SMDT antarkelompok perlakuan pH. Terjadi peningkatan ∆pHe setelah kultur asidifikasi ekstraseluler pada setiap kelompok pH setelah 72 jam inkubasi. Viabilitas sel tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan antarkelompok pH.KesimpulanIsolasi SMDT serta kultur dan asidifikasi ekstraseluler pada SMDT subjek dewasa muda dengan IMT>23 berhasil dilakukan. Respons adaptasi seluler pada SMDT orang dewasa muda dengan IMT>23 sudah mulai mengalami gangguan ditandai dengan ekspresi mRNA HIF-1α yang tidak menunjukkan perbedaan nilai yang signfikan antarkelompok pH. Pada SMDT, perbedaan viabilitas sel tidak signifikan antarkelompok pH.

---

Degenerative diseases are a critical health issue that require serious attention. One of the risk factors contributing to the progression of degenerative diseases is obesity. In obesity, physiological changes occur that can affect cellular adaptation responses, including adaptation to acidification. This study aims to investigate the effect of extracellular acidification on the expression of HIF-1α mRNA as an adaptation response in young adults peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) with a BMI >23.

Method

PBMCs were isolated and cultured in medium with varying pH levels. The pH adjustment of the medium was done by adding 0.01 M HCl. The cells were incubated for 72 hours. The culture medium being replaced every 24 hours. Changes in extracellular pH were measured using pH meter. Cell viability was assessed using the trypan blue method. RNA was isolated from the harvested cells. The relative expression of HIF-1α mRNA was analyzed using the Livak method based on CT values in qRT-PCR.

Results

No significant differences were found in HIF-1α mRNA expression in SDMT between pH treatment groups. An increase in ∆pHe was observed after extracellular acidification culture in each pH group after 72 hours of incubation. Cell viability did not show significant differences between pH groups.

Conclusion

Isolation of SMDT as well as culture and extracellular acidification in SMDT of young adult subjects with BMI>23 were successfully performed. The cellular adaptation response in. The cellular adaptation response in PBMCs of young adults with a BMI >23 appears to be impaired, as indicated by the lack of significant differences in HIF-1α mRNA expression between the pH groups. In PBMCs, the difference in cell viability across the pH groups is not significant."

"Preeklampsia merupakan penyebab morbiditas dan mortalitas ibu hamil tertinggi di dunia dan diperkirakan diderita oleh 2-8% ibu hamil di seluruh dunia. Preeklampsia ditandai dengan hipertensi dan gangguan sistemik multipel yang terjadi pada kehamilan dengan penyebab multifaktorial. Tahap patogenesis preeklampsia diawali dengan insufisiensi plasenta yang berlanjut pada disfungsi endotel vaskular sistemik maternal. L-citrulline dapat dijadikan sebagai representasi dari produksi NO dan aktivitas NOS. L-citrulline merupakan bahan baku untuk pembuatan L-arginine yang selanjutnya dapat dipecah menjadi NO oleh NOS. Dalam penelitian ini dipelajari perubahan kadar L-citrulline dan aktivitas NOS dalam hubungannya dengan gangguan vaskular yang dilakukan pada sel darah maternal dan jaringan plasenta. Subyek penelitian dibagi menjadi kelompok preeklampsia berat dan kelompok kontrol berupa hamil normotensi. SMDT dipisahkan dari sampel darah maternal menggunakan larutan gradien Ficoll menurut cara Boyum. SMDT dibuat menjadi sel lisat dengan cara dilisiskan melalui proses beku-cair. Plasenta diambil dari tiga kotiledon berbeda. Bahan uji plasenta ditimbang 50 mg dan 100 mg kemudian masing-masing dilumatkan dengan homogenizer setelah ditambahkan buffer sampai 1 ml, disentrifugasi, dan supernatan diambil untuk dianalisis. Metode yang digunakan untuk pengukuran kadar L-Citrulline adalah Elisa kompetitif. Sedangkan pengukuran aktivitas enzim NOS menggunakan prinsip kolorimetrik dengan reaksi serial.b. Hasil menunjukkan kadar L-citrulline pada SMDT PEB berbeda signifikan dibandingkan kontrol dengan kadar L-citrulline SMDT PEB lebih tinggi dibandingkan kontrol. Sedangkan kadar L-citrulline pada plasenta kedua kelompok tidak berbeda signifikan dan lebih tinggi pada kelompok PEB. Aktivitas NOS pada SMDT dan plasenta PEB tidak berbeda signifikan dengan kontrol.

---

Preeclampsia is a hypertension disease in pregnancy. The prevalence of preeclampsia 2-8% worldwide. The pathogenesis stage of preeclampsia begins with placental insufficiency which continues with maternal systemic vascular endothelial dysfunction. L-citrulline can be used as an indicator for NO production and NOS activity. L-citrulline is the raw material for L-arginine, the substrate of NOS for NO production. In this study, L-citrulline levels and NOS activity impairment were studied in relation to vascular disorders in maternal blood cells and placental tissue. The subjects were divided into a group with severe preeclampsia and a control group consisting of normotensive pregnancies. PBMC was separated from maternal blood samples using a Ficoll gradient solution according to the Boyum method. The method used to measure L-Citrulline levels is competitive Elisa. Meanwhile, measuring NOS enzyme activity uses colorimetric principles with serial reactions. Results showed that the L-citrulline levels in PBMC of severe preeclampsia group were significantly different compared to the control with higher L-citrulline levels severe preeclampsia group than the control. Meanwhile, L-citrulline levels in the placenta between groups were not significantly different. NOS activity in PBMC and placenta of severe preeclampsia group were not significantly different from controls."