Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Protein Jembrana Superficial Unit (JSU) dapat dijadikan sebagai vaksin untuk pengobatan penyakit Jembrana. Protein JSU, yang dikode oleh gen env, disisipkan ke dalam plasmid pGEX-6P1 dan diekspresikan melalui Escherichia coli strain BL21 sebagai inangnya. Tujuan penelitian adalah untuk meneliti berbagai pengaruh konsentrasi IPTG terhadap ekspresi protein rekombinan JSU pGEX-6P1. Sel E. coli (pembawa konstruk pGEX-6P1) ditumbuhkan pada medium Luria Betani (LB) cair 50 ml dan diinkubasi pada shaker incubator hingga mencapai kepadatan sel (OD) OD600 0,6. Induksi Isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside (IPTG) selama 1 jam dengan tiga konsentrasi perlakuan, yaitu 100 μM, 150 μM, dan 200 μM. Sel dipecah dengan dua metode, yaitu Freeze and thaw dan sonikasi kemudian pelet hasil pemecahan sel dikoleksi sebagai inclusion body. Solubilisasi protein dilakukan dengan menambahkan solubilize buffer pada pelet kemudian dilution buffer untuk tahap refolding. Protein dimurnikan melalui Gluthatione Sepharose 4B dengan metode batch capture. Hasil analisis SDS-PAGE menunjukkan ukuran protein JSU pGEX-6P1 yang tepat, yaitu ± 60 kDa pada setiap perlakuan (konsentrasi) IPTG. Pita pada induksi IPTG 100 μM terlihat lebih tebal dibandingkan dengan pita pada induksi 150 μM dan 200 μM. Hasil penelitian disimpulkan bahwa induksi IPTG 100 μM menghasilkan protein rekombinan JSU pGEX-6P1 yang optimal.

---

Jembrana Superficial Unit (JSU) protein can be used as a vaccine material for controlling Jembrana disease. JSU protein that encoded by the env gene was inserted into the plasmid pGEX-6P1 and expressed through the Escherichia coli strain of BL21 as a host. The aim of this study was to determine the effect of IPTG concentrations against the expression of JSU pGEX-6P1 recombinant protein. E. coli cells (pGEX-6P1 constructs carrier) were grown in 50 ml Luria Bertani (LB) liquid medium and was incubated on a shaker incubator until it reaches the cell density (OD) OD600 0.6. Induction of Isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside (IPTG) for 1 hour with three concentrations of the treatment, there are 100 μM, 150 μM, and 200 μM. The cells was disrupted by two methods of cell lysis, Freeze and thaw and sonication, then the pellet was collected as inclusion body. Protein is solubilized by adding a buffer into the pellet and using dilution buffer for refolding step. Proteins purified using Gluthatione Sepharose 4B by batch capture method. The analysis of SDS-PAGE was shown exactly the protein size of JSU pGEX-6P1 ± 60 kDa for each treatment (concentration) IPTG. Band at 100 μM IPTG induction seems thicker than the band on the induction of 150 μM and 200 μM. The study was concluded that 100 μM IPTG induction produces an optimal of JSU pGEX-6P1 recombinant protein."

"Penisilin dari kelompok antibiotik β-laktam dianggap mampu menjadi produk antibiotik superior di pasaran global. Akibat fenomena resistensi antibiotik turunan pertama, enzim penisilin G Asilase (PGA) berperan penting pada industri antibiotik semisintetik β-laktam seperti amoksisilin. Enzim PGA dari Achromobacter xylosoxidans yang diekspresikan menggunakan teknologi DNA rekombinan pada sel inang ekspresi E. coli BL21 (DE3) dan E. coli Arctic Express (DE3) menghasilkan badan inklusi yang bersifat insoluble. Optimasi ekspresi enzim PGA dilakukan dengan parameter konsentrasi penginduksi isopropil-β-D-galaktopiranosida (IPTG) dan suplementasi media dengan CaCl2. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui parameter optimal berupa variasi konsentrasi IPTG dan penambahan CaCl2 pada ekspresi gen penyandi Penisilin G Asilase (PGA) yang berasal dari A. xylosoxidans pada sel kompeten E. coli Arctic Express (DE3) dan E. coli BL21 (DE3) serta mengamati ekspresi gen penyandi enzim PGA secara intraseluler dan ekstraseluler. Ekspresi gen dilakukan secara lambat dengan perlakuan suhu rendah, yaitu 20°C untuk E. coli BL21 (DE3) dan 10°C untuk E. coli Arctic Express (DE3), selama 16 jam menggunakan media Luria Bertani (LB). Produk enzim AxPGA dianalisis secara kualitatif menggunakan elektroforesis SDS-PAGE dan secara kuantitatif menggunakan uji Bradford dan uji aktivitas hidrolisis. Sel inang ekspresi E. coli Arctic Express (DE3) dan E. coli BL21 (DE3) mengekspresikan enzim AxPGA periplasmik dengan aktivitas 6,3 ± 0,76 U/mL dan 4,7 ± 0,05 U/mL berturut-turut, sedangkan sitoplasmik dengan aktivitas 7,3 ± 0,2 U/mL dan 4,5 ± 0,11 U/mL berturut-turut. Hasil analisis menunjukkan bahwa enzim AxPGA berhasil diekspresikan pada E. coli Arctic Express (DE3) dan E. coli BL21 (DE3) dengan induksi IPTG 0,5 mM dan penambahan CaCl2 10 mM secara optimal.

---

Penicillin from the β-lactam antibiotic group is capable to become a superior antibiotic product in the global market. As a result of the first-generation antibiotic resistance phenomenon, the penicillin G Acylase (PGA) enzyme plays an important role in the β-lactam semisynthetic antibiotic industry such as amoxicillin. The PGA enzymes from Achromobacter xylosoxidans which is expressed using recombinant DNA technology using E. coli Arctic Express (DE3) and E. coli BL21 (DE3) host cell expressions produce insoluble inclusion bodies Optimization of PGA enzyme expression was carried out with isopropyl-β-D-galactopyranoside (IPTG) induction and CaCl2 media supplementation parameter. This study aims to determine the optimal parameters of IPTG concentrations and CaCl2 supplementation on the expression of the penicillin G acylase (PGA) encoding gene from A. xylosoxidans in E. coli Arctic Express (DE3) and E. coli BL21 (DE3) and to observe intracellular and extracellular expressions. Gene expression carried out slowly with low temperature, 20°C for E. coli BL21 (DE3) and 10°C for E. coli Arctic Express (DE3), for 16 hours using Luria Bertani (LB) media. The AxPGA enzyme product analyze qualitatively using SDS-PAGE electrophoresis and quantitatively using the Bradford test and hydrolysis activity. E. coli Arctic Express (DE3) dan E. coli BL21 (DE3) host cells expressed the periplasmic AxPGA enzymes with activity of 6,3 ± 0,76 U/mL dan 4,7 ± 0,05 U/mL, respectively, while the cytoplasmic AxPGA enzymes with activity of 7,3 ± 0,2 U/mL and 4,5 ± 0,11 U/mL respectively. The results showed that the AxPGA enzyme was optimally expressed in E. coli Arctic Express (DE3) and E. coli BL21 (DE3) with 0,5 mM IPTG induction and 10 mM CaCl2 media supplementation."