Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Siklofosfamid merupakan obat antikanker berupa pro-drug yang diaktifkan oleh enzim sitokrom P450 menjadi 4-hidroksisiklofosfamid 4-OHCP. Kadar 4-OHCP dalam tubuh dapat menggambarkan pembentukan fosforamid mustar yang dapat mengalkilasi DNA dan memberikan efek sitotoksik terhadap sel kanker. Analisis siklofosfamid dan 4-OHCP dilakukan pada Dried Blood Spot DBS 17 pasien kanker Rumah Sakit Kanker Dharmais yang diberikan rejimen siklofosfamid secara KCKUT-SM/SM sebagai upaya pemantauan terapi obat. Pengambilan darah dilakukan pada jam ke-2 dan ke-4 setelah pemberian kemoterapi melalui ujung jari. Hasil validasi metode bioanalisis parsial menghasilkan akurasi dan presisi intra hari dengan diff dan koefisien variasi KV tidak lebih dari 15 dan tidak lebih dari 20 pada konsentrasi LLOQ. Kurva kalibrasi yang linear didapat pada rentang 50-30.000 ng/mL untuk siklofosfamid dan 10-1000 ng/mL untuk 4- OHCP. Metode ini telah memenuhi syarat akurasi dan presisi intrahari sesuai European Medicines Agency EMEA tahun 2011. Hasil analisis pada 17 pasien kanker menunjukkan kadar siklofosfamid berkisar antara 6045,980 ng/mL hingga 37024,403 ng/mL dan 4-OHCP berkisar antara 33,155 ng/mL hingga 246,362 ng/mL. Hasil yang diperoleh dapat menjadi salah satu parameter pemantauan terapi siklofosfamid.

---

Cyclophosphamide is an anticancer in the form of prodrug activated by cytochrome P450 enzyme into 4 hydroxycyclophosphamide 4 OHCP. 4 OHCP levels in the body can describe formation of phosphoramide mustard that can alkylate DNA and give cytotoxic effects to cancer cells. Analysis of cyclophosphamide and 4 OHCP was performed on 17 Dried Blood Spots DBS of cancer patients who received cyclophosphamide as chemotherapy regiment from Dharmais Cancer Hospital by KCKUT SM SM for therapeutic drug monitoring. Samples were taken at 2nd and 4th hours after drug administration with finger prick method.

The results of partial validation method produced intra day accuracy and intra day precision with diff and coefficient of variation CV were not more than 15 and not more than 20 in LLOQ concentration. Linear calibration curves were obtained in the range of 50 ndash 30,000 ng mL for cyclophosphamide and 10 1000 ng mL for 4 OHCP. This method has been fulfilled for intra day accuracy and precision according to European Medicines Agency EMEA Guidelines, 2011. The results of the 4 OHCP concentration analysis in 17 cancer patients showed that cyclophosphamide levels ranging from 6045.980 ng mL to 37024.403 ng mL and 4 OHCP was in the range of 33.155 ng mL to 246.362 ng mL. The results could be one of the monitoring parameters of cyclophosphamide therapy."

"Siklofosfamid adalah kemoterapi yang bekerja sebagai agen pengalkilasi dan merupakan prodrug sehingga membutuhkan aktivasi oleh enzim sitokrom P450 untuk berubah menjadi metabolit aktifnya, yaitu 4-hidroksisiklofosfamid 4-OHCP. Tujuan penelitian ini adalah untuk memperoleh metode optimum dan tervalidasi untuk analisis siklofosfamid dan 4-OHCP dalam dried blood spot menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi-Tandem Spektrometri Massa KCKUT-SM/SM. Penelitian siklofosfamid dan 4-hidroksisiklofosfamid secara simultan ini dikembangkan pertama kalinya dalam sampel dried blood spot. Metabolit 4-OHCP bersifat tidak stabil dalam cairan biologis, sehingga prosedur derivatisasi dilakukan sebelum analisis, yaitu menggunakan semikarbazid hidroklorida. Pemisahan dilakukan pada kolom UPLC Class BEH C18 menggunakan fase gerak asam format 0,01 dalam air-metanol 50:50 dengan mode elusi isokratik pada laju alir 0,3 mL/menit selama 4 menit. Deteksi massa dilakukan pada Waters Xevo TQD dengan Electrospray Ionization positif untuk siklofosfamid, 4-OHCP, dan heksametilfosforamid sebagai baku dalam dengan nilai m/z berturut-turut adalah 260,968 > 139,976; 338,011 > 224,979; dan 180,17 > 92,08. Ekstraksi dilakukan menggunakan metode pengendapan protein dengan pelarut metanol ? ?asetonitril 2:1. Metode ini linear pada rentang 50-30.000 ng/mL untuk siklofosfamid dan 10-1.000 ng/mL untuk 4-OHCP dengan r berturut-turut adalah 0,9972 dan 0,9984. Nilai LLOQ untuk siklofosfamid dan 4-OHCP berturut-turut adalah 50 ng/mL dan 10 ng/mL. Nilai diff dan KV untuk akurasi dan presisi intra hari dan antar hari tidak melebihi 15 dan tidak melebihi 20 pada konsentrasi LLOQ. Secara keseluruhan metode ini telah memenuhi persyaratan validasi yang mengacu pada European Medicines Agency Guidelines 2011.

---

Cyclophosphamide is a chemotherapy that acts as an alkylating agent and a prodrug that requires activation by the cytochrome P450 enzyme to convert into its active metabolite, 4 hydroxycycrophosphamide 4 OHCP. The purpose of this research is to obtain the optimum and validated method for the analysis of cyclophosphamide and 4 OHCP in dried blood spots using Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry UPLC MS MS. This simultaneous cyclophosphamide and 4 OHCP study was developed for the first time in dried blood spot sample. The 4 OHCP metabolite is unstable in biological fluids, so the derivatization procedure was performed prior to analysis, using semicarbazide hydrochloride. The separation was performed on UPLC Class BEH C18 column using mobile phase of 0.01 formic acid in water methanol 50 50 with isocratic elution mode at 0.3 mL minute for 4 min. Mass detection was performed on Waters Xevo TQD with Positive Electrospray Ionization for cyclophosphamide, 4 OHCP, and hexamethylphosphoramide as internal standard with m z values respectively are 260.968 139.976 338.011 224.979 and 180.17 92.08. Extraction was performed using protein precipitation method with methanol acetonitrile 2 1. This method was linear in the range of 50 30,000 ng mL for cyclophosphamide and 10 1,000 ng mL for 4 OHCP with r respectively are 0.9972 and 0.9984. The LLOQ values for cyclophosphamide and 4 OHCP were 50 ng mL and 10 ng mL. The value of diff and CV for accuracy and precision intra days and between days did not exceed 15 and did not exceed 20 of LLOQ concentrations. Overall this method has met the validation requirements that refer to European Medicines Agency Guidelines 2011."

"Siklofosfamid (CP) merupakan salah satu obat kanker golongan agen pengalkilasi yang efektif digunakan untuk mengobati kanker payudara, limfoma non-Hodgkin, dan lain-lain. CP harus diubah menjadi metabolit aktifnya (4-hidroksisiklofosfamid/4-OHCP) untuk menghasilkan efek terapeutik. Siklofosfamid diubah menjadi 4-OHCP oleh beberapa enzim di hati, salah satunya sitokrom P450 2B6 (CYP2B6). CYP2B6 merupakan salah satu gen CYP yang paling bersifat polimorfik yang dapat memengaruhi regulasi transkripsional, ekspresi protein, dan kadar 4-OHCP dalam tubuh. Kadar 4-OHCP dapat menjadi parameter bahwa terapi yang diberikan efektif. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan kecepatan hidroksilasi 4-OHCP dengan cara membandingkan konsentrasi 4-OHCP terhadap CP. Penelitian ini menggunakan 43 sampel Dried Blood Spot (DBS) pasien kanker payudara Indonesia yang terdapat CP dalam regimen terapinya. Darah pasien rata-rata diambil pada 2,23±0,38 jam (tmax CP) setelah pemberian kemoterapi. Sampel diekstraksi dengan pengendapan protein dan dianalisis menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi Tandem Spektrometri Massa (KCKUT-SM/SM); kolom Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 100 mm; 1,7μm); suhu kolom 50°C; fase gerak asam format 0,01% - metanol dengan elusi gradien; laju alir 0,15mL/menit; volume injeksi 10 μL. Deteksi massa menggunakan ESI (+) dengan nilai m/z 260,65>140,03 untuk siklofosfamid, 33,65>221,04 untuk 4-OHCP-SCZ, dan 337,71>225,05 untuk 4-OHCP-d4-SCZ. Validasi parisal yang dilakukan memenuhi persyaratan FDA 2018. Metode ini linear pada rentang 5 – 60.000 ng/mL untuk CP dan 5 – 1000 ng/mL untuk 4-OHCP. Hasil Penelitian menunjukkan bahwa dari 43 pasien didapatkan rentang CP 2106,16 – 34386,90 ng/mL. dan 4-OHCP 24,85 – 995,071 ng/mL. Berdasarkan rasio 4-OHCP/CP, terdapat 53% (23 subjek) tergolong rapid metabolizer, dan 47% (20 subjek) tergolong poor metabolizer.

---

Cyclophosphamide (CP) is an alkylating agent for anticancer and effective in treating breast cancer, non-Hodgkin lymphoma, and others. CP must be converted to its active metabolite (4-hydroxycyclophosphamide/4-OHCP) to produce a therapeutic effect. CP is converted to 4-OHCP by several enzymes in the liver, cytochrome P450 2B6 (CYP2B) is one of them. CYP2B6 is one of the most polymorphic CYP genes that can affect transcriptional regulation, protein expression, and the level of 4-OHCP in the body. The level 4-OHCP can be a parameter of whether the therapy is effective. Therefore, the purpose of this study is to determine the hydroxylation rate of 4-OHCP by comparing the level of 4-OHCP to CP. This study used a sample of 43 breast cancer patients Dried Blood Spot who contained CP in their regiment therapy which was taken in average time 2.23± 0.38 hours (tmax CP) after CP’s administration. Samples were extracted by protein precipitation method and analysed using Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (UPLC-MS/MS); Acquity UPLC BEH C18 column (2,1 x 100 mm; 1,7μm); temperature was 50°C; 0,01% formic acid - methanol as mobile phase with gradient elution for 6 minutes; flow rate was 0,15mL/minute; and injected volume 10 μL. Mass detection using a triple quadrupole with ESI (+) and multiple reaction monitoring detection with m/z values 260,65>140,03 for cyclophosphamide, 33,65>221.04 for 4-OHCP-SCZ, dan 337.71>225.05 for 4-OHCP-d4-SCZ. The partial validation performed has successfully met the validation requirements that refer to FDA 2018. This method was linear in the range of 5 – 60.000 ng/mL for CP and 5 – 1000 ng/mL for 4-OHCP. The result showed that from 43 patients, the CP levels ranged from 2106,16 – 34386,90 ng/mL. and 24,85 – 995,071 ng/mL for 4-OHCP. Based on the 4-OHCP/CP ratio, 53% (23 subjects) were classified as rapid metabolizers, and 47% (20 subjects) were classified as poor metabolizers."

"Siklofosfamid (CP) adalah antikanker golongan pengalkilasi (nitrogen mustar) dan prodrug yang akan dimetabolisme menjadi bentuk metabolit aktif, 4-hidroksisiklofosfamid (4-OHCP). Oleh karena itu, efektivitas terapi CP ditentukan oleh konsentrasi 4-OHCP dalam darah. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan metode analisis tervalidasi dari CP dan 4-OHCP secara simultan dalam Dried Blood Spots (DBS) dengan SIL (Stable Isotop Labeled) 4-OHCP-d4 sebagai baku dalam menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi-Tandem Spektrometri Massa (KCKUT-SM/SM) dan mengaplikasikannya untuk studi kecepatan 4-hidroksilasi siklofosfamid pada pasien kanker etnis Melayu. Preparasi sampel dilakukan secara pengendapan protein menggunakan metanol. Pemisahan dilakukan pada kolom BEH C18 menggunakan fase gerak asam format 0,01% - asetonitril dalam mode gradien pada 0,2 mL/menit. Deteksi massa dilakukan pada Waters Xevo TQD menggunakan ESI + untuk CP, 4-OHCP-SCZ, dan baku dalam 4-OHCP-d4-SCZ dengan nilai m/z berturut-turut: 260,90 > 140,01; 333,90 > 220,94; dan 337,97 > 224,93. Metode ini linier dalam kisaran 10 - 40.000 ng/mL untuk CP dan 5 - 4.000 ng/mL untuk 4-OHCP dengan nilai r keduanya ≥ 0,9980. Metode ini memenuhi persyaratan validasi yang mengacu pada pedoman EMEA 2011 dan FDA 2018. Studi kecepatan 4-hidroksilasi siklofosfamid terhadap 40 pasien kanker etnis Melayu dilakukan berdasarkan nilai rasio bioaktivitasnya (kadar 4-OHCP terhadap siklofosfamid) dan diperoleh hasil 80% sebagai ultrarapid metabolizer (UM) dan 20% sebagai poor metabolizer (PM).

---

Cyclophosphamide (CP) is an anticancer alkylating group (nitrogen mustard) and a prodrug that will be metabolized into a form of its active metabolite, 4-hydroxycyclophosphamide (4-OHCP). Therefore, the effectiveness of CP therapy is determined by 4-OHCP concentration in blood. The purpose of this study was to obtain a validated analysis method of CP and 4-OHCP simultaneously in Dried Blood Spots (DBS) with SIL (Stable Isotope Labeled) 4-OHCP-d4 as an internal standard by Ultra High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry (UPLC-MS/MS) and applied it to the study of the 4-hydroxylation of cyclophosphamide rate of Malay ethnic cancer patients. Sample preparation was carried out by protein precipitation using methanol. Separation was carried out at BEH C18 column using 0.01% formic acid - acetonitrile mobile phase in gradient mode at 0.2 mL/min. Mass detection was carried out at Waters Xevo TQD using ESI + for CP, 4-OHCP-SCZ, and internal standard 4-OHCP-d4-SCZ with m/z values, respectively: 260,90 > 140,01; 333,90 > 220,94; and 337,97 > 224,93. This method is linear in the range of 10 - 40,000 ng/mL for CP and 5 - 4,000 ng/mL for 4-OHCP with both r values ≥ 0.9980. This method has successfully met the validation requirements that refer to the EMEA 2011 and FDA 2018 guidelines. Study of cyclophosphamide 4-hydroxylation rate to 40 subjects of Malay ethnic cancer patients was carried out based on the value of its bioactivity ratio (4-OHCP level to cyclophosphamide) and obtained results of 80% as ultrarapid metabolizer (UM) and 20% as poor metabolizer (PM)."

"Siklofosfamid merupakan obat kemoterapi yang secara luas digunakan dalam penanganan berbagai jenis kanker. Sistitis hemoragik pada kandung kemih merupakan salah satu efek samping yang sering muncul dari penggunaan siklofosfamid. Akrolein sebagai metabolit siklofosfamid teridentifikasi sebagai penyebab sistitis hemoragik. Akrolein dalam tubuh akan mengalami metabolisme melalui konjugasi dengan glutation menghasilkan asam 3-hidroksipropil merkapturat (3-HPMA) yang dieksresikan melalui urin. Senyawa sulfidril diantaranya Mesna dan N-asetilsistein digunakan untuk mencegah teijadinya sistitis hemoragik. Biji petal cina mengandung senyawa sulfidril dan berpotensi digunakan sebagai altematif untuk mencegah teijadinya sistitis hemoragik melalui induksi produksi dan metabolisme glutation. Penelitian ini bertujuan untuk menilai potensi ekstrak biji petal cina dalam mencegah teijadinya sistitis hemoragik pada tikus terinduksi siklofosfamid dengan menganalisis senyawa 3-HPMA dfilfltn urin dan 4-hidroksisiklofosfamid dalam plasma pada tikus. Optimasi ekstraksi biji petal cina dilakukan terhadap perendaman dengan akuades dan maserasi menggunakan pelarut etanol 30, 50, 70 dan 96%. Ekstrak basil optimasi distandarisasi lalu digunakan untuk uji secara in vivo. Sebanyak 30 ekor tikus yang terbagi dalam 3 kelompok digunakan dalam uji ini. Kelompok pertama merupakan kelompok kontrol negatif yang diberikan akuades selama satu minggu. Kelompok kedua diberikan akuades selama satu minggu dan pada hari ketujuh diberikan injeksi siklofosfamid secara intraperitoneal dengan dosis 50 mg/kg. Kelompok ketiga diberikan ekstrak biji petal cina melalui per oral sekali sehari dengan dosis 300 mg/kg selama satu minggu, lalu pada hari ketujuh satu jam setelah pemberian ekstrak terakhir diinjeksi siklofosfamid dengan dosis 50 mg/kg. Darah diambil dari vena ekor tikus pada menit ke 30 dan ke 60 setelah pemberian injeksi siklofosfamid sedangkan urin dikumpulkan selama 24 jam. Analisis 3-HPMA dan 4-hidroksisiklofosfamid dilakukan dengan kromatografi cair kineija ultra tinggi tandem spektrometri massa (KCKUT-SM/SM). Analisis 3-HPMA menggunakan internal standar 3-HPMA-D3 (asam 3-hidroksipropil merkapturat-Deuterium), dengan fase gerak = 0,1% asam format dalam air:0,l% asam format dalam asetonitril = 90:10j kolom KCKUT BEH Cig (2,1 x 100mm, l,7p.m), laju alir 0,2 mL/menit; waktu analisis 7 menit; deteksi MS pada m/z 221,968>90,993 untuk 3-HPMA dan 225,032>17 untuk 3-HPMA-D3. Analisis 4-hidroksisiklofosfamid menggunakan internal standar heksametilfosforamid dengan fase gerak = 0,1% asam format dalam ainmetanol =50;50; kolom KCKUT BEH Ci8 (2,1 x 100mm, l,7}im), laju alir 0,3 mL/menit; waktu analisis 7 menit; deteksi MS pada m/z 333,65>221,01 untuk 4- hidroksisiklofosfamid dan 180,07>134,9 untuk heksametilfosforamid. Hasil penelitian menunjukkan bahwa etanol 70% merupakan pelarut yang menghasilkan ekstrak dengan kadar sulfidril tertinggi dan kadar mimosin terendah pada biji petal cina yang telah direndam selama 24 jam. Ekstrak etanol 70% biji petal cina memenuhi standar mutu ekstrak obat tradisional. Metode analisis 3-HPMA dalam urin dan 4- hidroksisiklofosfamid dalam plasma menggunakan KCKUT SM/SM telah tervalidasi sesuai acuan FDA, 2018 dan EMA, 2011 dan dapat diterapkan dalam analisis in vivo. Pemberian ekstrak etanol 70% biji petal cina dapat meningkatkan kadar 3-HPMA dalam urin dan tidak mempengaruhi kadar metabolit aktif 4-hidroksisiklofosfamid dalam plasma. Pemberian ekstrak biji petal cina memberikan pengaruh positif pada hasil uji histopatologi kandung kemih dan pada profil hematologi tikus. Ekstrak biji petal cina berpotensi untuk digunakan sebagai altematif dalam mencegah teijadinya sistitis hemoragik pada penggunaan siklofosfamid.

---

Cyclophosphamide is a chemotherapy drug that is widely used in the treatment of various types of cancer. Hemorrhagic cystitis in bladder is one of side effects that often arise from using of cyclophosphamide. Acrolein as metabolite of cyclophosphamide was identified causing hemorrhagic cystitis. Acrolein in the body undergoes metabolism through conjugation with glutathione to produce 3-hydroxypropyl mercapturic acid (3- HPMA), which is excreted in urine. Sulfhydryl compounds including Mesna and Nacetylcysteine are used to prevent hemorrhagic cystitis. Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit seeds contain sulfhydryl compounds and have the potential to be used as an alternative to avoid the occurrence of hemorrhagic cystitis through production and metabolism of glutathione. This study aims to evaluate potential of Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit seeds extract on cyclophosphamide-induced hemorrhagic cystitis rats through analyze 3-HPMA in urine and 4-hydroxycyclophosphamide in plasma. The seed extraction was optimized with distilled water soaking treatments and maceration using 30, 50, 70 and 96% ethanol solvent. The optimized extract was standardized and then used for in vivo test. Thirty rats which is divided in 3 groups were used in this study. The first group, a negative control group, was given distilled water for one week. The second group was given distilled water for one week, and on the seventh day, they were given an intraperitoneal injection of cyclophosphamide at a dose of 50 mg/kg. The third group was given seed extract orally once a day at a dose of 300 mg/kg for one week, and then on the seventh day, one hour after administration of the last extract, they were injected with cyclophosphamide at a dose of 50 mg/kg. Blood was taken from rat vein tail 30 and 60 min after administration of the cyclophosphamide injection. Rat urine was collected for 24 h. Analysis of 3-HPMA and 4- hydroxycyclophosphamide was carried out by LCMS/MS. 3-HPMA analysis was conducted using the internal standard 3-hydroxypropyl mercapturic acid-Deuterium (3- HPMA-D3) with the mobile phase = 0.1% formic acid in water: 0.1% formic acid in acetonitrile = 90:10; column UPLC BEH Cis (2.1 x 100mm, 1.7pm); flow rate 0.2 mL/min; analysis time 7 minutes; and MS detection at m/z 221.968> 90.993 for 3- HPMA and 225.032>17 for 3-HPMA-D3. Analysis of 4-hydroxycyclophosphamide was conducted using internal standard hexamethylphosphoramide with a mobile phase = 0.1% formic acid in water: methanol = 50:50; column UPLC BEH Ci8 (2.1 x 100mm, 1.7pm); flow rate 0.3 mL/min; analysis time 7 minutes; and MS detection at m/z was 333.65>221.01 for 4-hydroxycyclophosphamide and 180.07>134.9 for hexamethylphosphoramide. The results show that 70% ethanol produced extracts with the highest sulfhydryl content and the lowest mimosine content in soaked Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit seeds. The 70% ethanol extract of seeds was made of qualified traditional medicinal extracts. The analysis method of 3-HPMA in unne and 4- hydroxycyclophosphamide in plasma using LCMS/MS has been validated according to 2018 FDA guidelines and 2011 EMA guidelines and can be applied to in vivo analysis. Administration of 70% ethanol extract of Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit seeds can increase the level of 3-HPMA in urine and does not affect the level of the active metabolite 4-hydroxycyclophosphamide in plasma. Administration of Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit seeds extract had a positive effect on the results of bladder histopathology and hematological profiles. The Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit seed extract has the potential to be used as an alternative to avoid the occurrence of hemorrhagic cystitis in the use of cyclophosphamide."