Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Ruang lingkup dan cara penelitian : Adanya imunoglobulin M (IgM) pada serum merupakan salah satu tanda terjadinya suatu infeksi awal, sehingga dengan ditemukannya suatu bahanl metode yang bisa mendeteksi adanya IgM secara tepat dan cepat, penyakit dapat segera terdeteksi. Pada penelitian ini ,dicoba membuat antibodi monoklonal terhadap IgM manusia dengan cara memfusikan sel splenosit mencit imun dengan sel mieloma NS1 yang dibantu dengan fusogen Poly Ethylene Glycol 4000,50%. Hasil fusi kemudian didistribusikan kedalam pelat mikrotiter dan sel hibrid diseleksi dengan mengunakan medium Hypoxantine, Aminopterine , Tymidine. Setelah terbentuk koloni sel hibrid kemudian dilakukan penapisan antibodi dengan cara ELISA dengan IgM manusia sebagai antigen. Sel hibrid dengan nilai optical density tinggi dilakukan kloning dan subkloning. Hasil dari subkloning dengan nilai OD tinggi dilakukan uji reaksi silang dengan imunoglobulin lain yaitu IgG, IgA dan serum minus IgG, IgM dan IgA. Untuk menguji ada tidaknya reaksi silang dengan imunoglobulin lain pembuktian adanya reaksi silang dilakukan uji kompetitif dan uji dengan menggunakan berbagai konsentrasi dari IgG,IgM dan IgA. Uji lain yang dilakukan adalah uji untuk menentukan klas dan subklas dari antibodi monoklonal yang dihasilkan. Hasil : Sel splenosit yang digunakan untuk fusi adalah 1,2x108 clan 3x107 sel mieloma dengan perbandingan 1 : 4. Dari 576 sumur pelat milcrotiter didapatkan pada 333 sumur tumbuh koloni set hibrid, 93 sumur tidak terdapat koloni dan 150 sumur kontaminasi. Setelah dilakukan penapisan antibodi, koloni sel hibrid dengan nilai OD tinggi disubkloning dan diambil 5 untuk disubkloning kembali. Dan 5 klon awal tersebut diambil 8 klon dengan nilai OD tinggi untuk uji reaksi silang. Dui kedelapan klon tersebut setelah diuji reaksi silang masih mengenali IgG clan IgA, kemudian diuji dengan uji kompetitif dan uji dengan berbagai konsentrasi. Dari kedua uji tersebut, kedelapan klon menunjukkan tidak adanya reaksi silang dengan imunoglobulin lain yaitu IgG, IgA dan serum minus. Pada uji penentuan klas dan subklas diperoleh basil 6 klon merupakan klas dan subklas IgG2a dan 2 klon tidak diidentifikasi. Kesimpulan : Diperoleh 8 klon yang spesifik terhadap imunoglobulin M manusia. Dan kedelapan klon tersebut 6 klon merupakan klas dan subklas IgG2a dan 2 klon tidak diidentifikasi. Untuk mendapatkan hasil yang memuaskan perlu dilakukan pengujian terhadap rantai ringan dari 1gM dan dilakukan tahap produksi dan pemurnian."

"Prevention of dental caries is still continuing, because the prevalence caries is high. There was many methods to prevent dental caries etc, dental education, oral hygiene, special method on tooth brushing, water fluoridation, fissure scalant and later on the passive immunization with monoclonal antibodies. The purpose of this study was to investigate about monoclonal antibodies IgA, IgG1 and IgG3 against Streptococcus mutans 1 (c) in basic paste for inhibiting the growth Streptococcus mutans. The monoclonal antibodies were IgA Ab, IgG1 Ab and IgG3 Ab. Formula basic paste from PT "X" contained Aqua, Sorbitol, Nipagin, Dicalcium Phosphat, Titanium Dioxid, Sodium Carboxyl, Methyl Sel, Sodium Lauryl Sulfate and Sacarin. Basic paste was mixed with monoclonal antibodies IgA, IgG1 and IgG3 in room temperature (27°C), then to investigate zone of inhibition from these toothpaste with Wistreich and Lochtman methods. The data obtained in this study was analyzed with one way Anova and LSD. The result showed that there was a significant differences between basic paste with or without monoclonal antibodies. From the data analyzed in this study it can be concluded that monoclonal antibodies against S.mutans 1 (c) could be formulation with basic paste."

"[Latar Belakang: Reaktivasi CMV pasca transplantasi ginjal 3 bulan pertama 40-80% dan 20-50% menjadi penyakit CMV. Pencegahan pasca transplantasi dapat dilakukan dengan terapi preemptive saat terjadi reaktivasi CMV yang ditandai dengan DNA CMV >500 kopi/mL. Di Indonesia belum ada pemeriksaan DNA CMV, sebaliknya pemeriksaan IgG CMV tersedia di seluruh daerah, mudah dan murah.Tujuan: Untuk mengetahui insidens reaktivasi CMV pada resipien seropositif 3 bulan pertama pasca transplantasi ginjal, mengetahui korelasi antara DNA CMV dengan peningkatan titer IgG CMV, dan cutoff point titer IgG CMV saat reaktivasi.Metode: Penelitian ini kohort prospektif 3 bulan. Uji korelasi DNA CMV dengan peningkatan IgG CMV menggunakan uji korelasi Spearman’s rho. Penentuan cutoff point terbaik IgG CMV menggunakan kurva ROC dengan menilai AUC.Hasil: Jumlah subyek penelitian 23 resipien seropositif CMV. Reaktivasi pertama pada minggu ke-4 pasca transplantasi (2 orang), diikuti minggu ke-6 (4 orang) dan ke-10 (3 orang), sehingga keseluruhan 9 orang (39%). Dua (22,2%) orang meninggal karena penyakit CMV, dan 7 (77,8%) orang tanpa tanda/keluhan klinis CMV dengan kreatinin serum 1,19 (SB 0,29) mg/dL serta eGFR 69,99 (SB 19,92) mL/menit/1,73 m2. Korelasi positif antara DNA CMV dengan IgG CMV ditemukan bermakna mulai minggu ke-8 (r=0,70 p <0,001), minggu ke-10 (r=0,83 p <0,001) dan minggu ke-12 (r=0,72 p <0,001), dengan peningkatan minimal 2 kali. Cutoff point titer IgG CMV terbaik pada minggu ke-10, yaitu 401,4 AU/dL (sensitivitas 88,9 %, spesifisitas 92,9%), Pada minggu ke-8 dan ke-12 juga diperoleh AUC yang baik untuk ditetapkan nilai cutoff point titer IgG CMV, yaitu berturut-turut 502,7 AU/dL (sensitivitas 83,3 %, spesifisitas 94,1%) dan 679,35 AU/dL (sensitivitas 81,9 %, spesifisitas 90,8%).Kesimpulan: Insidens reaktivasi pada resipien seropositif pasca transplantasi ginjal 3 bulan pertama adalah 39%. Terdapat korelasi positif yang bermakna antara DNA CMV kuantitatif dengan peningkatan minimal 2 kali titer IgG CMV pada resipien seropositif mulai pada minggu ke-8 pasca transplantasi ginjal; dengan cutoff point terbaik titer IgG CMV pada minggu ke-10., Background: Reactivation of CMV in the first 3 month after kidney transplantation reached 40-80%, and 20-50% developed to CMV disease. CMV reactivation in seropositive recipients are prevented by pre-emptive therapy, when CMV DNA >500 copy/mL. Indonesia hasn’t performed CMV DNA real-time routinely, however do measuring CMV antibody-IgG because it is simple, cheap and available.Objective: to determine the incidence of CMV reactivation in seropositive recipients, identify correlation between quantitative CMV DNA with increasing CMV antibody-IgG titre, and determine CMV antibody-IgG cutoff point when reactivation.Methods: prospective cohort study for 3 months. Using Spearman‘s rho test to correlate CMV DNA and CMV antibody-IgG, and using ROC curve to identify AUC to decide the best cutoff point of CMV antibody-IgG.Results: All of subject is 23 seropositive recipients. The first reactivation on 4th week after transplantation (2 persons), followed on 6th week (4 persons) and on 10th week (3 persons), so the total is 9 recipients (39%). Two (22,2%) recipients died due to sepsis, and 7 (77,8%) recipients is healthy without signs/symptoms of CMV infection. Their serum creatinin is 1,19 (SB 0,29) mg/dL and eGFR 69,99 (SB 19,92) mL/menit/1,73 m2. There was positive correlation between CMV DNA with CMV antibody-IgG on the 8th week (r=0,70 p <0,001), on the10th week (r=0,83 p <0,001) and on the 12th week (r=0,72 p <0,001), with double increasing of antibody IgG titre. The best of antibody IgG cutoff point was on the 10th week (401,4 AU/dL, sensitivity 88,9 %, specifity 92,9%). On 8th and 12th week was found a good antibody IgG cutoff point titre too, respectively 502,7 AU/dL (sensitivity 83,3 %, specifity 94,1%) and 679,35 AU/dL (sensitivity 81,9 %, specifity 90,8%).Conclusion: Incidence of reactivation in seropositive recipients after kidney transplantation was 39%. There was positive correlation between quantitative CMV DNA with double increasing of CMV antibody-IgG titre started from 8th week after transplantation. The best cutoff point was on 10th week.]"

"ABSTRAKAplikasi Metode Immunohistokimia IHC Untuk Mendeteksi Keberadaan Betanodavirus Pada Ikan Kerapu Macan Epinephelus fuscoguttatus Deteksi antigen betanodavirus pada 26 ekor ikan kerapu macan Epinephelus fuscoguttatus yang diduga terinfeksi telah dilakukan dengan metode imunohistokimia. Tanda klinis pada benih yang terinfeksi sering menunjukkan perilaku berenang yang tidak normal, seperti posisi vertikal, berputar dan terjadi beberapa perubahan pigmentasi. Metode screening yang dilakukan oleh RT-PCR memberikan hasil positif dengan munculnya band pada hasil elektroforesis pada 230 bp. Secara histopatologi terdapat sel-sel yang mengalami nekrotik dengan vakuolasasi di organ otak dan mata. Deteksi imunohistokimia menggunakan antibodi monoklonal spesifik untuk betanodavirus menunjukkan reaksi positif dengan pembentukan warna coklat di jaringan organ otak dan mata. Pengujian imunohistokimia adalah salah satu metode yang cocok untuk deteksi dan diagnosis infeksi betanodavirus pada ikan.

---

ABSTRACT Application of Immunohistochemistry Methods for Detecting of Betanodavirus in Tiger Grouper Fish Epinephelus fuscoguttatus Detection of betanodavirus antigen on the 26 heads of infected tiger grouper fish Epinephelus fuscoguttatus by immunohistochemistry was done. Clinical sign of the infected larva and juvenile stages often show abnormal swimming behaviour, including vertical positioning, spinning and some change in pigmentation. Methods of screening done by RT PCR give result showed by electrophoresis band with all most sample give positif in 230 base pairs. Histopathologically, there were necrotic area with vacuolation in brain and retine organs. Immunohistochemistry detection using specific monoclonal antibody to betanodavirus showed positif reaction with brown colours formation in the internal organs like brain and retine. Immunohistochemistry assay is one of the suitable methods for detection and diagnose of betanodavirus infection in fish."

"Deteksi cepat yang umum digunakan untuk penyakit demam berdarah (DBD) atau Dengue Fever (DF) adalah dengan memanfaatkan monoklonal antibodi (mAb) antiprotein non-struktural 1 (anti-NS1). Akan tetapi, terdapat kelemahan dari penggunaan mAb, seperti biaya dan waktu produksi yang tinggi serta lama. Single domain-antibody (sdAb) atau nanobodi yang dapat mendeteksi protein non-struktural 1 (nanobodi anti- NS1) dari DENV sedang dalam tahap pengembangan sebagai solusi permasalahan tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan buffer dengan pH paling optimal yang mampu meningkatkan stabilitas termal dari nanobodi anti-NS1 klon DD5 dan DD7 menggunakan metode TSA. Nanobodi anti-NS1 klon DD5 dan DD7 yang menjadi sampel diproduksi pada Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) dan dipurifikasi dengan metode Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC). Nanobodi anti-NS1 berhasil diproduksi dan dipurifikasi sebanyak 294 μg/mL untuk klon DD5 dan 377 μg/mL untuk klon DD7. Dari sepuluh buffer yang diuji, hanya beberapa buffer yang menghasilkan data konsisten, yakni sodium fosfat pH 7, pH 7,4, dan pH 9; HEPES pH 7 dan pH 8; serta Tris- HCl pH 7. Buffer lain menunjukkan data yang tidak konsisten. Hal tersebut, disebabkan oleh keadaan uji yang tidak optimal, seperti rasio protein dan dye yang kurang baik, pelipatan protein yang tidak sempurna atau terbukanya lipatan protein pada awal uji, dan berikatannya dye dengan plastik dari plate. Kedua klon nanobodi anti-NS1 paling stabil berada dalam buffer sodium fosfat dengan pH 7,4 yang saat ini digunakan sebagai buffer penyimpanan saat ini. Rata-rata titik leleh (Tm) pada buffer tersebut merupakan yang paling tinggi untuk klon DD5 (47,9±3,7oC) maupun klon DD7 (50,8±4,3oC). Nanobodi anti-NS1 pada kedua klon menunjukkan destabilisasi dalam buffer lain yang ditandai turunnya rata-rata Tm pada kedua klon. Kesimpulan yang didapatkan dari penelitian ini adalah metode Thermal Shift Assay (TSA) dapat digunakan untuk mendapatkan buffer dengan pH optimal yang meningkatkan stabilitas termal dari nanobodi anti-NS1.

---

Rapid detection commonly used for Dengue Fever (DF) is by utilizing monoclonal antibodies (mAb) against non-structural protein 1 (anti-NS1). However, there are weaknesses by using mAb, such as high production costs and long production time. Single domain-antibody (sdAb) or nanobody, which can detect non-structural protein 1 (anti- NS1 nanobody) from DENV, is currently under development as a solution to these problems. This study aims to obtain the most optimal pH buffer capable of enhancing the thermal stability of DD5 and DD7 anti-NS1 nanobodies using the Thermal Shift Assay (TSA) method. The DD5 and DD7 anti-NS1 nanobodies, which are the samples, were produced in Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) and purified using the Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC) method. The anti-NS1 nanobodies were successfully produced and purified, yielding 294 μg/mL for DD5 clone and 377 μg/mL for DD7 clone. Out of the ten tested buffers, only a few produced consistent data, namely, sodium phosphate pH 7, pH 7.4, and pH 9; HEPES pH 7 and pH 8; and Tris-HCl pH 7. Other buffers showed inconsistent data due to suboptimal test conditions, such as poor protein-to-dye ratio, imperfect protein folding, protein unfolding at the beginning of the test, and dye binding to the plastic of the plate. Both stable anti-NS1 nanobody clones were found in sodium phosphate buffer with pH 7.4, currently used as the storage buffer. The average melting point (Tm) in this buffer was the highest for both DD5 (47.9±3.7°C) and DD7 (50.8±4.3°C) clones. The anti-NS1 nanobodies in both clones showed destabilization in other buffers, indicated by a decrease in the average Tm for both clones. The conclusion drawn from this research is that the Thermal Shift Assay (TSA) method can be used to obtain the optimal pH buffer that enhances the thermal stability of anti- NS1 nanobodies."

"Infeksi dengue DENV adalah penyakit yang diperantarai nyamuk yang manifestasinya dapat mengarah pada dengue hemorrhagic fever DHF dan/atau dengue shock syndrome DSS yang dapat mengakibatkan kematian. Di Indonesia, DHF sudah endemis dan menjadi penyakit yang terjadi sepanjang tahun. Protein non struktural-1 NS1 dari DENV diketahui merupakan biomarker dalam diagnosis dengue karena protein ini bersirkulasi dalam darah selama fase akut penyakit. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan antibodi monoklonal mAb untuk mendeteksi antigen NS1 dari DENV serotipe 3 DENV3. Sel hibridoma penghasil mAb diperoleh dengan memfusikan sel B dari mencit yang diimunisasi dengan antigen NS1 yang diekspresikan pada sel CHO-K1 dengan sel PAI myeloma. Seleksi hibridoma dengan ELISA indirect diperoleh 16 klona yang berpotensi menghasilkan antibodi anti-NS1. Tujuh klona terbaik dipilih untuk dikarakterisasi dengan metode IFA terhadap antigen rekombinan NS1 dan hasilnya 6 klona positif menunjukkan reaksi sinyal fluoresens. Klona mAb 4-2D, 4-4F, dan 2-7A diuji terhadap protein NS1 native dari DENV1, DENV2, DENV3, dan DENV4, dan ketiga mAb tersebut mampu mengenali secara spesifik protein NS1 dan tidak bereaksi terhadap protein virus yang lain. Terdapat reaktivitas silang dengan 3 serotipe lainnya yang mengindikasikan bahwa mAb yang diujikan mengenali epitop lestari antigen NS1. Analisis prediksi epitop NS1 juga dilakukan secara in silico terhadap beberapa strain DENV lainnya. Namun, studi lebih lanjut mengenai pemetaan epitop dan afinitas pengikatan antigen-antibodi perlu dilakukan untuk menentukan mAb yang paling potensial sebagai bahan baku kit diagnostik.

---

Dengue DENV is a mosquito borne infection disease which its manifestation can be lead to a lethal dengue hemorrhagic fever DHF and or dengue shock syndrome DSS . In Indonesia, DHF has been endemic and the disease occurs throughout the year. Non structural 1 NS1 protein of DENV is known to be a biomarker in dengue diagnosis since the protein is abundantly circulating in the blood during acute phase of the disease. The aim of this study to develop monoclonal antibodies mAbs derived from DENV3 to detect NS1. Hybridoma mAb producing cells were obtained by fusing B cells from an immunized mice with NS1 antigen expressed on CHO K1 cells, with PAI myeloma cells. Hybridoma selection with indirect ELISA showed 16 clones that could be potentially produce anti NS1 antibodies.

Seven up to sixteen clones were selected to be characterized by IFA against recombinant NS1 antigen and the result showed 6 clones produce fluorescence signals. Clones mAb 4 2D, 4 4F, and 2 7A were tested against native NS1 proteins from DENV1, DENV2, DENV3, and DENV4, and these mAbs were able to recognize specifically NS1 protein and did not react against other viral proteins. There is a cross reactivity within 3 other serotypes which initially indicate that mAbs recognizes the conserved epitopes determinant of the NS1 antigen. Epitopes prediction analysis was also performed in silico against several others DENV strains. However, further studies of epitope mapping and antigen antibody binding affinity are necessary to determine the most potential mAbs for diagnostic tools. "

"Traditional column chromatography dominates current purification technology, and many of the productivity gains that have been achieved have relied on upscaling such devices. However, this comes with a cost penalty and the pharmaceutical industry has reached the point at which further upscaling becomes economically unsupportable. This book offers a broad-based reassessment of old and new purification methods, incorporating an analysis of innovative new trends in purification. The book has wide coverage of different antibody purification strategies and brings together top-tier experts to address problems in process-scale antibody purification."

"Translational strategies for development of antibody-based therapeutics should allow understanding of the relationship between the ?unit dose? and ?unit effect? with respect to both beneficial and deleterious effects from early stages of development. The flow of information from later to earlier stages of development should provide opportunities to facilitate selection of more effective novel and next-generation drug candidates. Selection and evaluation of relevant biomarkers in early preclinical development in "relevant" animal models should allow for identifying potential risks to humans and establishing safe First-In-Human (FIH) dosing strategies. Hence, integration of knowledge with respect to target antigen properties such as antigen distribution, expression profile, kinetic properties, target pharmacology, antigen isoforms and pharmacological redundancy in health and disease, as well as antibody design criteria, such as antibody isotype, affinity, PK/PD and safety is a critical necessity for the design of effective translational strategies. Additionally, these factors will further offer critical differentiating characteristics for next-generation antibodies, and novel technologies prove instrumental in generation of biosuperior antibody candidates for market entry. This book will examine many important considerations necessary for the design of effective translational strategies during the development of antibody-based therapeutics."