Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Momentum disahkannya UU no. 33 tahun 2014 tentang Jaminan Produk Halal menjadi acuan awal pengembangan metode deteksi molekuler DNA porsin terhadap kehalalan produk. Undang-undang ini mewajibkan seluruh produk yang masuk dan beredar di Indonesia tersertifikasi halal, termasuk tidak boleh mengandung fragmen babi. Deteksi dilakukan pada jumlah sekelumit jejak DNA yang masih tersisa di dalam gelatin cangkang kapsul setelah melalui proses pembuatan yang panjang dengan pH dan suhu ekstrim. Untuk itu, optimasi metode ekstraksi sangat berperan penting agar mendapatkan jumlah DNA yang memadai. Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan metode optimal perolehan DNA dan menentukan kondisi optimal metode deteksi molekular DNA porsin menggunakan metode Polymerase Chain Reaction yang sensitif. Metode PCR yang digunakan adalah PCR duplex dan PCR nested dengan target sekuens DNA ATP8 dan Cytb. Optimasi dilakukan pada metode ekstraksi DNA dengan mengubah jumlah replikat sampel, modifikasi komposisi proses resuspensi dan pelisisan sel, jumlah campuran saat tahap awal isolasi DNA, serta pemekatan pada tahap akhir pengisolasian DNA. Hasil optimasi menunjukan jumlah replikat gelatin optimum adalah delapan sampel ekstraksi. Optimasi PCR dilakukan dengan membandingkan metode PCR duplex dan PCR nested pada uji sensitivitas, serta optimasi kondisi masing-masing PCR tersebut. Hasil positif mengandung DNA porsin dinyatakan dengan terbentuknya dua amplikon 212bp dan 398bp pada PCR duplex atau satu amplikon 387bp pada PCR nested. Dari enam titik konsentrasi DNA yang diujikan pada uji sensitivitas, PCR nested dapat mendeteksi konsentrasi DNA hingga 1 fg/ ??l sedangkan PCR duplex yang hanya dapat mendeteksi hingga 1 ng/ ??l. Deteksi terhadap sampel kapsul suplemen menunjukan bahwa terdeteksi DNA porsin dalam sampel dengan metode PCR nested dan PCR duplex. Metode duplex dan nested PCR dapat diterapkan sebagai metode deteksi awal secara kualitatif namun tidak kuantitatif. ......Halal product assurance regulation, which was established under Law no. 33 year 2014, gave a major impact for the development of molecular detection method of porcines DNA in a product. This law obliges all products in Indonesia to have halal status, included no pigs fragment at all. Traces amount of DNA from gelatin and capsule shell which was still remaining after long manufacturing process under extreme pH and temperature, were detected and amplified. Thus, optimization of DNA extraction method is important to get the sufficient amount of DNA. The aims of this study are to obtain an optimum DNA collection method and to determine optimum condition of sensitive molecular detection method of porcines DNA using PCR. The sequence DNA targets ATP8 and Cytb were amplified using duplex and nested PCR methods. The optimization on number of sample replication, on composition mix in resuspension and cell lysis process, on the amount of the solution used when starting the DNA isolation process, and the final concentration of DNA isolation process have done. Result showed that the optimum numbers of replication for gelatin are eight times. Optimization of PCR was done by comparing nested PCR and duplex PCR for sensitivity test, also for both PCR conditions. Two amplicon of 212bp and 398bp in duplex PCR or one amplicon of 387bp in nested PCR were obtained only in sample that positive contains porcines DNA. Six different concentrations of template DNA that has been carried out for sensitivity test in both methods showed that nested PCR can detect as low as 1fg l DNA while duplex PCR can only detect 1ng l DNA concentration as the lowest. Porcines DNA has been detected in all capsule shell samples. Optimized duplex and nested PCR method could be applied as early qualitative detection.

Abstrak :
Bahan utama dari cangkang kapsul obat dihasilkan dari gelatin. Kulit dan tulang sapi atau babi merupakan sumber utama yang paling banyak digunakan untuk pembuatan gelatin. Undang-Undang No. 33 Tahun 2014 tentang Jaminan Produk Halal mewajibkan semua produk yang beredar di Indonesia bersertifikat halal, hal ini termasuk tidak boleh mengandung fragmen babi. Keberadaan DNA di dalam gelatin cangkang kaspul hanya sekelumit sebagai akibat dari pembuatan gelatin yang menggunakan pH dan suhu yang ekstrem. Oleh karena itu diperlukan metode peroleh DNA yang optimum dan deteksi molekuler yang sensitif terhadap keberadaan DNA porsin di dalam cangkang kapsul. Penelitian ini bertujuan untuk mengoptimasi perolehan DNA lewat ekstraksi, mengoptimasi dua metode PCR, yaitu duplex PCR dan nested PCR dan membandingkan sensitivitas kedua metode tersebut serta mendeteksi kandungan porsin pada empat sampel cangkang kapsul obat herbal. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah Polymerase Chain Reaction PCR yang merupakan metode deteksi molekular berbasis DNA. Optimasi ekstraksi dilakukan dengan mengubah jumlah replikat ekstraksi DNA yang terdiri dari jumlah sampel yang diekstraksi, modifikasi komposisi proses resuspensi dan pelisisan sel serta jumlah replikat saat tahap akhir pengisolasian DNA. Jumlah sampel yang diekstraksi memberikan hasil optimum pada 8 replikat. Optimasi metode PCR dilakukan dengan mengoptimasi suhu annealing dan komposisi komponen PCR. Metode nested PCR mempunyai sensitivitas lebih baik dibandingkan dengan duplex PCR. Metode nested PCR masih dapat mendeteksi hingga 1 fg/ L cetakan DNA sementara duplex PCR hanya sampai 1 ng/ L. Analisis dilakukan dengan bantuan software dan pengamatan visual. Namun, dalam hal efisiensi metode duplex PCR lebih baik dibandingkan nested PCR. Ditemukan kandungan DNA porsin pada keempat sampel cangkang kaspul obat herbal menggunakan metode duplex maupun nested PCR. ......Capsule shell is mainly composed by gelatin. Most gelatin is made by skin and bone of porcine or bovine. All products in Indonesia are obliged halal certified by Law Number 33 Year 2014 on Halal Product Assurance, included free porcine fragment. DNA in capsule shell gelatin remain in a trace amount as a result of manufacturing of gelatin with extreme pH and temperature. Therefore, optimum DNA acquisition method and sensitive molecular detection method are required for tracing DNA in capsule shell gelatin. This study was aimed to optimize DNA acquisition method through extraction, optimize duplex and nested PCR and compare sensitivity for two PCR methods also detect porcine in four herbals capsule shell samples. Method for this study is Polymerase Chain Reaction PCR, molecular detection based on DNA. Optimization of extraction method was carried out by changing the number of DNA extraction replicate, consist of number of extracted samples, modification composition of resuspension and lysis process, and number of replicate in final stage of isolation DNA process. The number of extracted samples gave optimum result in 8 replicates. Optimization of PCR method was carried out by optimizing the annealing temperature and composition component of PCR. Nested PCR method has better sensitivity than duplex PCR method. Nested PCR method could detect as low as 1 fg L DNA template while duplex PCR until 1 ng L DNA template only analysed with software based quantification and visual quantification. On the other hand, duplex PCR method showed better efficiency process than nested PCR method. Through two optimization of those two PCR methods, nested and duplex PCR, trace of porcine DNA in four herbals capsule shell samples was detected.

Abstrak :
Pendahuluan : Resesi gingiva merupakan salah satu kelainan pada jaringan periodontal yang sangat umum ditemukan pada populasi global. Modalitas pengobatan konvensional seperti pencangkokan gingiva menggunakan jaringan autologous memiliki keterbatasan dalam hal invasivitas, morbiditas area donor, dan tingkat keberhasilan yang bervariasi. Gelatin yang merupakan turunan dari kolagen mengandung sekuens arginin–glisin–asam aspartat (RGD) yang penting untuk mendukung adhesi dan interaksi sel di sekitarnya. Pengembangan biomaterial seperti hidrogel gelatin dinilai menjanjikan karena sifatnya yang biokompatibel, kemudahannya untuk disesuaikan, dan karakternya yang mirip dengan matriks ekstraseluler membuatnya menjadi agen regenerasi yang potensial. Tujuan: Mengevaluasi karakter fisik hidrogelgelatin crosslinked dengan menggunakan EDC/NHS dan non-crosslinked sebagai biomaterial potensial untuk scaffoldgingiva. Metode: Hidrogel gelatin dibuat menjadi 2 kelompok yaitu kelompok crosslink dengan menggunakan EDC/NHSdan kelompok non-crosslinked. Sampel dilakukan uji morfologi, uji viskositas, dan analisis gugus fungsi. Perbedaan morfologi diuji dengan uji T test independen dan hasil analisis viskositas dan gugus fungsi dilaporkan secara deskriptif. Hasil: Terdapat perbedaan bermakna antara kelompok hidrogel gelatin crosslinked dan non-crosslinked dimana kelompok gelatin crosslinked memiliki interkonektivitas yang lebih besar. Kelompok non-crosslinked tidak dapat dilakukan uji viskositas karena sifatnya yang temperatur sensitif. Analisis uji FTIR menunjukkan tidak terdapat perbedaan gugus fungsi yang signifikan antara kedua kelompok tersebut. Kesimpulan: Hidrogel gelatin crosslinked dengan menggunakan EDC/NHS memberikan gambaran scaffold yang lebih stabil dan potensial sebagai biomaterial scaffold gingiva. ......Introduction : Gingival recession is a kind of mucogingival deformity widely found in the global population. Conventional treatment modalities such as gingival grafting using autologous tissue have limitations in terms of invasiveness, donor site morbidity, and variable success rates. Gelatin, derived from collagen, contains the arginine–glycine–aspartic acid (RGD) sequence, which is crucial for supporting cell adhesion and interactions in its vicinity. The development of biomaterials like gelatin hydrogels might be promising due to their biocompatible nature, ease of customization, and structural similarity to the extracellular matrix, making them a potential agent for gingival regeneration. Objective: To evaluate the physical characteristics of crosslinked gelatin hydrogel using EDC/NHS and non-crosslinked gelatin as a potential biomaterial for gingival scaffolds. Methods: Gelatin hydrogels were divided into two groups: the crosslinked group using EDC/NHS and the non-crosslinked group. The samples underwent morphological, viscosity, and functional group analysis. Morphological differences were assessed using an independent T-test, while viscosity and chemical composition analysis results were reported descriptively. Results: There is a significant difference between the crosslinked and non-crosslinked gelatin hydrogel groups, where the crosslinked gelatin group exhibits greater interconnectivity. Viscosity testing could not be conducted on the non-crosslinked group due to its temperature-sensitive nature. FTIR analysis indicates no significant difference in chemical composition between the two groups. Conclusion: The EDC/NHS crosslinked gelatin hydrogel provides a depiction of a more stable scaffold that has more potential as a biomaterial for gingival regeneration.