Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

Abstrak :
Siklofosfamid merupakan salah satu obat golongan agen pengalkilasi nitrogen mustar yang sering digunakan dalam kemoterapi kanker. Namun demikian, penggunaan siklofosfamid dengan dosis yang tinggi dan jangka waktu yang panjang telah terbukti dapat meningkatkan risiko terjadinya kanker sekunder. Hal ini dapat ditandai dengan terbentuknya DNA adduct yang mutagen, seperti N5-Nitrogen mustarformamidopirimidin (NM-Fapy-G). Oleh karena itu, adduct tersebut dapat dijadikan salah satu biomarker terjadinya kanker sekunder pada pasien yang menerima siklofosfamid. Beberapa peneliti telah mengembangkan metode untuk menganalisis NMFapy- G dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi – Tandem Spektrometri Massa (KCKUT-SM/SM). Namun demikian, seluruh penelitian tersebut masih menggunakan sel atau jaringan sebagai biospesimennya sehingga tidak aplikatif apabila ingin diimplementasikan kepada pasien. Oleh karena itu, tulisan ini dibuat untuk memaparkan gagasan terkait kesesuaian penggunaan Dried Blood Spot (DBS) sebagai metode biosampling darah; metode ekstraksi dan hidrolisis DNA yang tepat untuk memperoleh adduct NM-Fapy-G; dan metode analisis yang sesuai untuk menganalisis NM-Fapy-G. Berdasarkan studi literatur yang telah dilakukan, maka DBS telah terbukti dapat digunakan dalam penelitian ini; QIAamp DNA Mini Kit dapat digunakan untuk mengekstraksi DNA dari kertas DBS; metode yang telah dikembangkan oleh Gruppi et al., (2015) dapat digunakan untuk hidrolisis DNA; dan analisis dapat dilakukan dengan menggunakan kondisi analisis yang telah dikembangkan Chen et al., (2020) dengan sedikit modifikasi. Metode yang diajukan diharapkan dapat digunakan dalam penelitian NM-Fapy-G selanjutnya. Apabila hasil yang didapatkan positif, diharapkan dapat segera diimplementasikan untuk menganalisis NM-Fapy-G pada pasien kanker yang menerima siklofosfamid sehingga kemungkinan tejadinya kanker sekunder dapat diprediksi ......Cyclophosphamide is one of the alkylating nitrogen mustard agents that is frequently used for cancer chemotherapy. Nevertheless, long-term use of high dosage cyclophosphamide has been proven to increase the risk of secondary cancer. This can be traced by the mutagenic DNA adduct formation, for instance, N5-Nitrogen mustardformamidopyrimidine (NM-Fapy-G). Consequently, it may serve as one of the secondary cancer biomarkers in cancer patients who are receiving cyclophosphamide treatment. There are already several NM-Fapy-G analysis methods employing Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) developed by experts. However, cells and tissues are still utilized as the biospecimens, thus it is discovered not applicative and hard to be performed in patients. Therefore, this summary is presented to emphasize the idea of adopting Dried Blood Spot as the blood's biosampling method; DNA extraction and hydrolysis method that is suitable for enriching NM-Fapy- G adduct; and method that is proper for NM-Fapy-G analysis. Based on the literature study, DBS has been proven beneficial for this analysis; DNA can be extracted from the DBS cards by using QIAamp DNA Mini Kit; DNA hydrolysis can be executed according to the method that has been developed by Gruppi et al., (2015); and method from Chen et al., (2020) research with a little bit of adjustment can be applied for NM-Fapy-G analysis. Hopefully, the proposed idea will be accepted in future NM-Fapy-G analysis, so it can soon be implemented for NM-Fapy-G analysis in cancer patients who have been administered cyclophosphamide. Hence, the possibility of secondary cancer may be predicted.

Abstrak :
Asap rokok adalah sumber utama paparan akrilamida setelah makanan. Akrilamida diklasifikasikan sebagai senyawa berpotensi karsinogenik pada manusia (Grup 2A). Akrilamida dimetabolisme oleh enzim CYP2E1 menjadi glisidamida yang sangat reaktif terhadap DNA dan dapat membentuk DNA adduct sehingga menyebabkan efek karsinogenik pada manusia. Kadar akrilamida dalam asap rokok berkisar 1,000–7,991 μg/rokok yang dipengaruhi perbedaan merek rokok. Paparan akrilamida pada perokok 2,2–4,6 kali lebih tinggi daripada non perokok dan glisidamida 1,1–3,8 kali lebih tinggi daripada non perokok. Kadar akrilamida dan glisidamida dalam sampel Dried Blood Spot (DBS) belum diketahui. Keunggulan DBS yaitu nyaman bagi subjek, volume sampel kecil, analit lebih stabil, penyimpanan dan transportasi mudah, serta preparasi sampel sederhana. Aplikasi volumetrik menggunakan pipet volumetrik atau perangkat modern seperti microfluidic DBS dapat mengatasi efek hematokrit darah. Metode KCKUT-SM/SM dapat mengkuantifikasi sejumlah kecil analit karena menghasilkan pemisahan yang baik, waktu retensi cepat, sensitivitas dan selektivitas tinggi. Validasi metode serta analisis akrilamida dan glisidamida dalam sampel DBS perokok secara KCKUT-SM/SM penting dilakukan untuk mengukur risiko paparan akrilamida melalui asap rokok. Metode analisis menggunakan KCKUT-SM/SM dengan kolom Acquity® UPLC BEH C18; fase gerak asam formiat 0,1% dalam air-asetonitril (40:60 v/v) dengan elusi gradien; laju alir 0,20 mL/menit; deteksi massa menggunakan penganalisis massa triple quadrupole dengan mode Electrospray Source Ionization (ESI) positif tipe Multiple Reaction Monitoring (MRM); nilai m/z 71,99>55,0; 87,9>44,2; 75>58,0 untuk akrilamida, glisidamida, dan d3-akrilamida. Preparasi sampel dengan pengendapan protein menggunakan larutan pengekstraksi metanol. ......Cigarette smoke is the major source of acrylamide exposure after food. Acrylamide is classified as a probably carcinogenic to humans (Group 2A). Acrylamide is metabolized by CYP2E1 enzyme into glycidamide that very reactive to DNA and can form DNA adducts causing carcinogenic effects in humans. Acrylamide level in cigarette smoke is around 1.000–7.991 μg/cigarette caused by different cigarette brands. Acrylamide exposure in smokers is 2.2–4.6 times higher than non-smokers and glycidamide exposure 1.1–3.8 times higher than non-smokers. The levels of acrylamide and glycidamide in Dried Blood Spot (DBS) sample are still unknown. Advantages of DBS are convenient for subjects, small sample volumes, analytes are more stable, easy storage and transport, and simple sample preparation. Volumetric application by using volumetric pipettes or modern devices such as microfluidic DBS are used to overcome blood hematocrit effect. UHPLC-MS/MS method can quantify small amounts of analytes due to good separation, fast retention time, high sensitivity and selectivity. Method validation and analysis of acrylamide and glycidamide in DBS smokers by UHPLC-MS/MS is important to measure the risk of acrylamide exposure through cigarette smoke. Analysis method using UHPLC-MS/MS with Acquity® UPLC BEH C18 column; mobile phase was 0.1% of formic acid in water and acetonitrile (40:60 v/v) with gradien elution; flow rate was 0.20 mL/min; mass detection using triple quadrupole mass analyzer with positive Electrospray Source Ionization (ESI) and Multiple Reaction Monitoring (MRM) type; m/z values were 71.99>55.0; 87.9>44.2; 75>58.0 for acrylamide, glycidamide, and acrylamide-d3. Sample preparation with protein precipitation using methanol as extraction solvent.

Abstrak :
6-Merkaptopurin (6-MP) merupakan agen kemoterapi kanker yang termasuk dalam golongan antimetabolit antagonis purin. 6-Merkaptopurin harus melalui jalur metabolisme oleh tiopurin S-metiltransferase (TPMT) untuk menjadi metabolit inaktifnya, yaitu 6-metilmerkaptopurin (6-MMP) untuk mengurangi efek sitotoksik dari 6-MP yang dapat menyebabkan mielosupresi. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh metode optimum dan tervalidasi dalam menganalisis 6-MP dan 6- MMP secara simultan dalam sampel Dried Blood Spot menggunakan kromatografi cair kinerja ultra tinggi tandem spektrometri massa. Larutan kontrol kualitas dan kurva kalibrasi dibuat dengan menotolkan masing-masing sebanyak 40 μL pada kertas CAMAG DBS dan dikeringkan selama 3 jam. Kertas DBS dipotong dengan diameter 8 mm dan diekstraksi dengan larutan asetonitril-metanol (1:3) yang mengandung baku 5-fluorourasil (5-FU). Pemisahan dilakukan dengan kolom Waters Acquity UPLC Class BEH C18 1,7 μm (2,1 x 100 mm) dengan fase gerak berupa asam format 0,1% dalam air - asam format 0,1% dalam asetonitril dengan gradient elusi dan laju alir 0,2 mL/menit. Deteksi massa dilakukan dengan Waters Xevo TQD dengan Electrospray Ionization (ESI) positif untuk 6-MP dan 6-MMP dan ESI negative untuk 5-FU pada mode Multiple Reaction Monitoring. Deteksi 6- MP, 6-MMP, 5-FU berturut-turut adalah 153,09 > 119,09; 167,17 > 126,03; 129,09 > 42,05. Metode ini linear dalam rentang 26 ? 1000 ng/mL untuk 6-MP dan 13 - 500 ng/mL untuk 6-MMP dengan r berturut-turut adalah ≥ 0,998 dan ≥ 0,999. Nilai % diff dan koefisien variasi (KV) untuk akurasi dan presisi intra hari dan antar hari tidak lebih dari 15% dan tidak lebih dari 20% pada konsentrasi LLOQ. Metode ini memenuhi persyaratan selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, carry-over, dan efek matriks yang mengacu pada EMEA Guidelines. ...... 6-Mercaptopurine (6-MP) is a cancer chemotherapeutic agent that belongs to a class of purine antagonist antimetabolite. 6-Mercaptopurine has to go through the metabolic pathway by thiopurine S-methyltransferase (TPMT) to become its inactive metabolite, 6-methylmercaptopurine (6-MMP) to reduce the cytotoxic effect of 6-MP which can cause myelosuppression. This study aimed to obtain an optimum and validated method in analyzing 6-MP and 6-MMP simultaneously in Dried Blood Spot samples using ultra high-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The quality control and calibration curves solutions were made by respectively spot 40 μL at DBS CAMAG paper and dried for 3 hours. DBS papers were cut with a diameter of 8 mm and extracted with acetonitrilemethanol (1:3) containing internal standard 5-fluorouracil (5-FU). Separation was performed with Waters Acquity UPLC BEH C18 column Class 1.7 μm (2.1 x 100 mm) with a mobile phase consists of 0.1% formic acid in water ? 0.1% formic acid in acetonitrile with gradient elution and flow rate 0.2 mL/minute. Mass detection was done using Waters Xevo TQD with positive electrospray ionization (ESI) for 6-MP and 6-MMP and negative ESI for 5-FU in Multiple Reaction Monitoring mode. Detection of 6-MP, 6-MMP, 5-FU respectively was 153.09> 119.09; 167.17> 126.03; 129.09> 42.05. This method is linear with the range 26-1000 ng / mL for 6-MP and 13 to 500 ng / mL for 6-MMP with consecutive r value is ≥ 0,998 and ≥ 0,999. % Diff value and coefficient of variation (CV) for accuracy and precision of intra-day and inter-day are not more than 15% and not more than 20% at a concentration LLOQ. This method fulfilled the requirements of selectivity, linearity, accuracy, precision, carry-over, and matrix effects which refers to the EMEA Guidelines.