Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Latar Belakang. Penyakit COVID-19 yang disebabkan oleh SARS-CoV-2 dengan cepat menyebar dan menjadi Pandemi serta menimbukan kerugian yang sangat besar pada masyarakat di seluruh dunia. Deteksi virus yang cepat dan akurat memegang peranan penting untuk mengendalikan penyebaran di masyarakat dan membantu pasien untuk menghindari perkembangan penyakit lebih lanjut. Saat ini real-time Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (real-time RT-PCR) merupakan reference standard diagnostic test dalam mendeteksi SARS-CoV-2 di seluruh dunia. Real-time Reverse Transcriptase Loop Mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) merupakan metode amplifikasi asam nukleat isotermal yang memiliki sensitivitas dan spesifisitas tinggi dan waktu pengerjaan yang jauh lebih cepat dibandingkan real-time RT-PCR. Tujuan. Penelitian bertujuan untukiDetectTM SARS-CoV-2 Detection KitSARS-CoV-2.Metode. Penelitian ini merupakan uji kesesuaian dengan studi potong lintang dan menggunakan metode pengumpulan sampel secara consecutive sampling. Subjek penelitian yaitu spesimen swab nasofaring dan orofaring dalam VTM (N=80) yang dianalisis di Laboratorium Mikrobiologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit menggunakan uji kesesuaian Kappa aplikasi SPSS versi 25.Hasil. Dari 72 sampel valid yang diperiksa dengan real-time RT-LAMP iDetectTM SARS- CoV-2 Detection Kit dan real-time RT-PCR, 24 sampel terdeteksi positif oleh real-time RT-PCR dan hanya tiga sampel yang terdeteksi positif oleh real-time RT-LAMP. Tiga sampel yang terdeteksi positif oleh real-time RT-LAMP termasuk ke dalam sampel - sampel yang terdeteksi positif oleh real-time RT-PCR. Secara statistik, uji reliabilitas / uji kesesuaian dari penelitian kedua alat diagnostik ini menunjukkan nilai Kappa yang sangat rendah, yaitu 0,16. Uji kesesuaian Kappa kedua alat ini menunjukkan bahwa hasil pemeriksaan alat real-time RT-LAMP iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit tidak sesuai dengan alat real-time RT-PCR dalam mendeteksi SARS-CoV-2. Kesimpulan. Real-time RT-LAMP iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit tidak sesuai dengan alat real-time RT-PCR dan tidak dapat digunakan sebagai alat diagnostik dalam mendeteksi SARS-CoV-2.

---

Introduction. COVID-19 caused by SARS-CoV-2 quickly spread and became Global Pandemic and caused enormous losses to people around the world. Rapid and accurate virus detection plays an important role in controlling spread in the community and helping patients to avoid further disease progression. Currently, real-time Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (real-time RT-PCR) is determined as the reference standard diagnostic test for detecting SARS-CoV-2 worldwide. Real-time Reverse Transcriptase Loop Mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) is an isothermal nucleic acid amplification method that has high sensitivity and specificity and provide faster result than real-time RT-PCR. Aim. The research aims to compare real-time RT-LAMP iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit and real-time RT-PCR in detecting SARS-CoV-2. Method. This research is a comparison test with a cross-sectional study and uses a consecutive sampling method to collect samples. The research subjects were nasopharyngeal and oropharynx swab specimens in VTM (N=80) which were analyzed at the Clinical Microbiology Laboratory, Faculty of Medicine, Universitas Indonesia. The data obtained from the real-time RT-LAMP iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit and real-time RT-PCR test results were analyzed using Kappa test SPSS version 25.

Results. Of the 72 valid samples examined by the real-time RT-LAMP iDetectTM SARS- CoV-2 Detection Kit and real-time RT-PCR, 24 samples were detected positive by real- time RT-PCR and only three samples were detected positive by real-time RT-LAMP. Three samples that were detected positive by the real-time RT-LAMP were included in the samples that were detected positive by the real-time RT-PCR. Statistically, the comparison test of the research of these two diagnostic tools showed a very low Kappa value, which was 0.16. The Kappa suitability test of these two tools showed that the real- time RT-LAMP iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit were not compatible with the real- time RT-PCR in detecting SARS-CoV-2. Summary. Real-time RT-LAMP iDetectTM SARS-CoV-2 Detection Kit is not compatible with real-time RT-PCR and cannot be used as a diagnostic tool in detecting SARS-CoV-2."

"Pada akhir tahun 2019 dilaporkan beberapa kasus pneumonia di Wuhan, Cina yang disebabkan oleh Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Penyakit yang ditimbulkan oleh virus ini disebut sebagai coronavirus disease 2019 (COVID-19). Jumlah kasus COVID-19 terus mengalami peningkatan dan penyebarannya terjadi pada seluruh kelompok usia termasuk anak-anak. Pemeriksaan real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (rRT-PCR) telah diotorisasi oleh Food and Drug Administration (FDA) dan pada pemeriksaan ini dikenal istilah cycle threshold (Ct). Nilai Ct sering dijadikan acuan dalam menentukan tingkat keparahan penyakit pada anak, akan tetapi masih terdapat kontroversi apakah nilai Ct berhubungan dengan tingkat keparahan penyakit. Penelitian ini bermaksud mencari hubungan bermakna antara nilai Ct khususnya gen ORF1ab dan gen N dengan tingkat keparahan COVID-19 pada anak yang dibagi menjadi tingkat keparahan ringan dan sedang sampai kritis. Didapat 52 responden anak dalam penelitian ini, dengan 24 responden terdeteksi gen ORF1ab dan 49 responden terdeteksi gen N. Rerata nilai Ct gen ORF1ab kelompok ringan (33,5 ± 4,4) lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok sedang sampai kritis (31,0 ± 6,0). Median nilai Ct gen N kelompok ringan (34,8 [21,3 – 39,4]) lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok sedang sampai kritis (31,7 [19,4 – 38,9]). Tidak didapatkan hubungan bermakna baik antara nilai Ct gen ORF1ab (nilai p = 0,25) maupun gen N (nilai p = 0,159) dengan tingkat keparahan COVID-19 pada anak. Berdasarkan hasil penelitian ini, diperlukan berbagai pertimbangan dalam menginterpretasi nilai Ct.

---

At the end of 2019, several cases of pneumonia were reported in Wuhan, China caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2). The disease caused by this virus is known as Coronavirus Disease 2019 (COVID-19). The number of cases of COVID-19 continues to increase and its spread occurs in all age groups including children. Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (rRT-PCR) has been authorized by the Food and Drug Administration (FDA) and in this method a cycle threshold (Ct) value were obtained. The Ct value is often used as a reference in determining the clinical severity in children, but there is still controversy whether the Ct value is related to the clinical severity. This study intends to find a significant relationship between the Ct values, especially the ORF1ab gene and the N gene, with the COVID-19 clinical severity in children which is divided into mild and moderate to critical severity. There were 52 children in this study, with 24 children have ORF1ab gene detected and 49 children have N gene detected. The mean of ORF1ab gene Ct value in mild group (33.5 ± 4.4) was higher than moderate to critical group (31.0 ± 6.0). The median of N gene Ct value ​​in mild group (34.8 [21.3 – 39.4]) was higher than moderate to critical group (31.7 [19.4 – 38.9]). There was no significant relationship between the Ct value of the ORF1ab gene (p value = 0.25) and the N gene (p value = 0.159) with COVID-19 clinical severity in children. Based on the results of this study, various considerations are needed in interpreting the Ct value."

"Pandemi virus SARS-CoV-2 yang terjadi telah membuat kebutuhan untuk pemeriksaan massal deteksi virus menjadi meningkat. Saat ini pemeriksaan gold standard untuk mendeteksi virus SARS-CoV-2 adalah dengan metode reverse transcriptase quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) yang berbiaya mahal. Oleh karena itu dibutuhkan metode pemeriksaan alternatif yang lebih murah, cepat, dan mudah digunakan sebagai sistem deteksi virus. Metode Loop Mediated Isothermal Amplification LAMP) dapat melakukan reaksi amplifikasi nukleotida pada suhu isothermaltanpa perlu mesin thermal cycler dan dapat diamati langsung dengan penambahan zat pewarna. Metode deteksi virus berbasis LAMP yang dikembangkan menggunakan desain primer yang menarget gen S dan ORF1ab ditambah pewarna Calcein-Mangan dan senyawa tambahan Guanidine Hydrochloride (GuHCl). Sistem deteksi dilakukan optimasi konsentrasi komponen reaksi, suhu dan template yang menggunakan plasmid DNA kontrol. Optimasi didapatkan dengan konsentrasi reaksi FIP/BIP 0,4 µM, F3/B3 0,2 µM, Loop F/P 0,4 µM, Calcein-Mangan 12 µM, dan GuHCl 40 mM. Sistem LAMP yang dikembangkan dapat mendeteksi sekuens gen target pada DNA kontrol hingga 1 copy number dalam waktu sekitar 1 jam pada inkubasi suhu 55 ºC. Meski begitu, sistem LAMP yang dikembangkan belum mapu mengamplifikasi RNA virus SARS-CoV-2 hasil ekstraksi sampel swab pasien. Hal ini disebabkan oleh enzim Bst 3.0 yang dipakai dalam sistem LAMP tidak memiliki kemampuan reverse transcriptase yang diharapkan.

---

The SARS-CoV-2 virus pandemic has made the need for mass screening of virus detection increased. Currently, the gold standard  test to detect SARS-CoV-2 virus is reverse transcriptase quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) method that costly. Therefore, an alternative method that is cheaper, faster, and easier to use as a virus detection system is needed. The Loop Mediated Isothermal Amplification (LAMP) method can perform nucleotide amplification reactions at isothermal temperatures  without the need of thermal cycler  machine and can be observed directly with the addition of coloring agents. The LAMP-based virus detection method development use primers design targeting the S and ORF1ab genes with Calcein-Manganese dyes and the additive compound Guanidine Hydrochloride (GuHCl). The detection system performed optimization of the concentration of reaction components, temperature and template using plasmid DNA control. Optimization was obtained with reaction concentration of FIP/BIP 0.4 μM, F3/B3 0.2 μM, Loop F/P 0.4 μM, Calcein-Manganese 12 μM, and GuHCl 40 mM. The developed LAMP system can detect target gene sequences in control DNA up to  1 copy number in about 1 hour at 55 ºC incubation temperature. Even so, the LAMP system developed still unable to amplify the RNA of the SARS-CoV-2 virus from the extraction of patient swab samples. This issue occurred due to the Bst 3.0 enzyme that used in the reaction did not have reverse transcriptase activity as expected."

"Latar Belakang : COVID- 19 disebabkan SARS-COV-2. WHO menerbitkan protokol pemeriksaan laboratorium untuk deteksi virus menggunakan metode real time RT-PCR dari spesimen swab nasofaring dan orofaring. Metode ini cukup invasif. Diperlukan tehnik pemeriksaan yang relatif aman dan nyaman untuk pasien. Penelitian ini bertujuan untuk melihat efetivitas swab bukal sebagai alternatif pemeriksaan SARS-COV-2.Metode : Studi uji diagnostik ini dilaksanakan sejak tahun 2020 - 2021, mengambil spesimen swab nasofaring, swab orofaring dan swab bukal dari pasien positif COVID- 19. Dilakukan optimasi, ekstraksi RNA virus dan real time RT-PCR .Hasil Penelitian : Hasil studi mengumpulkan 68 spesimen dari pasien COVID-19. Hasil uji nasofaring, orofaring dan bukal positif adalah 24 spesimen. Hasil uji nasofaring dan orofaring positif dengan uji bukal negatif adalah 23 spesimen. Berdasarkan nilai Ct < 20 dan Ct <25, hasil kesesuaian positif dan negatif adalah 100%. Nilai Ct < 30 hasil kesesuaian positif 85,3 % dan negatif adalah 100%. Nilai Ct < 40 , hasil kesesuaian positif 51,1 % dan negatif adalah 100%. Kesimpulan : Swab bukal dapat digunakan sebagai pemeriksaan alternatif pada pemeriksaan SARS- CoV-2.

---

Background: COVID-19 caused by the SARS-COV-2 virus. WHO published protocol for the detection of the virus using the real time RT-PCR from nasopharyngeal and oropharynx swab specimens. This method is invasive. Required an examination technique that is relatively safe and comfortable. This study aims to see the effectiveness of the buccal swab as an alternative to the SARS-CoV-2 examination.

Methods: This diagnostic test study from 2020 to 2021, specimens of nasopharyngeal, oropharyngeal and buccal swabs from COVID-19. Specimens underwent an optimization, viral RNA extraction and real time RT-PCR.

Result : This study collected 68 specimens from COVID- 19 patients. The results of positive nasopharyngeal, oropharynx and buccal tests were 24 specimens. The results of a positive nasopharynx and oropharynx test with a negative buccal test were 23 specimens. Based on the values ​​of Ct < 20 and Ct < 25 , the results of positive agreement and negative are 100%. The value of Ct < 30 and Ct < 40  results in a positive agreement are 85.3% and 51,1 %. The negative  results are 100%.

Conclusion : Buccal swab can be used as an alternative test for SARS-CoV-2 examination."

"Pada bulan Desember, 2019, serangkaian kasus pneumonia dengan penyebab yang tidak diketahui muncul di China. Analisis data menunjukkan adanya coronavirus baru, yang diberi nama SARS-CoV-2. Beradasarkan WHO dan CDC pemeriksaan yang digunakan untuk mendeteksi SARS-CoV-2 adalah metode molekular RT-PCR, salah satu kit yang digunakan adalah BioCoV-19 RT-PCR. Penelitian ini bertujuan membandingkan uji RT-PCR kit BioCoV-19 RT-PCR dengan N1N2 CDC sebagai standar dalam mendeteksi SARS-CoV-2, serta melakukan uji deteksi minimal untuk mengetahui sensitivitas analitik dari kit BioCoV-19 RT-PCR, menguji reaksi silang terhadap mikroba saluran nafas lain, dan menilai secara deskriptif karakteristik subjek penelitian. Perbandingan uji kit BioCoV-19 RT-PCR dengan N1N2 CDC mendapatkan nilai sensitivitas, spesifisitas, nilai duga positif (NDP) dan nilai duga negative (NDN). Hasil pada penelitian ini menunjukkan bahwa sensitivitas dan spesifisitas BioCoV-19 RT-PCR Kit secara umum adalah 97,50% dan 100%, dengan Nilai Duga Positif (NDP) 100% dan Nilai Duga Negatif (NDN) 96,49%. Hasil uji minimal deteksi untuk primer-probe N1N2 CDC dan BioCoV-19 RT-PCR Kit setelah dilakukan dilusi bertingat sebanyak enam kali pengenceran yakni 3,5 kopi/reaksi (rerata nilai Ct 35,21). Uji reaksi silang tidak terdeteksi adanya reaksi silang dari 12 bakteri, tujuh virus dan tiga jamur. Karakteristik subjek penelitian lebih banyak pada laki-laki sebanyak (61,5%), untuk usia lebih banyak pada usia berkisar 20-40 tahun (56,29%), gejala klinis pasien saat datang lebih banyak gejala ringan.

---

In December, 2019, a series of pneumonia cases of unknown cause appeared in China. Analysis of the data indicated the presence of a new coronavirus, which was named SARS-CoV-2. Based on WHO and the CDC, the tests used to detect SARS-CoV-2 are the molecular RT-PCR method, one of the kits used is BioCoV-19 RT-PCR. This study aims to compare the RT-PCR test of the BioCoV-19 RT-PCR kit with the CDC's N1N2 as a standard in detecting SARS-CoV-2, as well as to conduct a minimal detection test to determine the analytical sensitivity of the BioCoV-19 RT-PCR kit, to test cross reactions against other respiratory tract microbes, and descriptively assessed the characteristics of the research subjects. Comparison of the BioCoV-19 RT-PCR test kit with N1N2 CDC obtained sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV). The results of this study showed that the sensitivity and specificity of the BioCoV-19 RT-PCR Kit in general were 97.50% and 100%, with a positive predictive value (PPV) of 100% and a negative predictive value (NPV) of 96.49%. The minimum test results for detection of the N1N2 CDC primer-probe and the BioCoV-19 RT-PCR Kit were carried out after six dilutions of 3.5 copies/reaction (mean Ct value 35.21). The cross-reaction test did not detect any positives of 12 bacteria, seven viruses and three fungi. The characteristics of the study subjects were more male (61.5%), for ages ranging from 20-40 years (56.29%), the clinical symptoms of the patients when they arrived were more mild symptoms."

"Penyakit Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) merupakan penyakit infeksi saluran pernafasan akut yang ditandai dengan batuk kering, sesak nafas, demam, dan Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). Penyakit COVID-19 disebabkan oleh infeksi virus SARS-CoV-2 di saluran pernafasan manusia. Menurut Satuan Tugas COVID-19, kasus terkonfirmasi COVID-19 di Indonesia sampai tanggal 28 Juli 2021 sebanyak 3.287.727 pasien dengan penambahan kasus 47.791 pasien baru per hari. Salah satu langkah memperlambat penyebaran tersebut adalah dengan meningkatkan laju deteksi keberadaan virus SARS-CoV-2 berbasis pendeteksian asam nukleat virus SARS-CoV-2. Satuan tugas COVID-19 Indonesia telah merilis daftar kit komersial yang diizinkan beredar untuk deteksi materi genetik virus SARS-CoV-2 salah satunya adalah kit Seasun U-TOPTM COVID-19 pabrikan dari Seasun Biomaterials. Korea Selatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui baku mutu kit Seasun dalam mendeteksi virus SARS-CoV-2 di Indonesia. Pengujian baku mutu kit Seasun dilakukan dengan membandingkan nilai Cycle threshold (Ct) kit Seasun terhadap kit golden standard US CDC serta uji diagnosis kit Seasun menggunakan 20 sampel pasien positif COVID-19 dan 10 sampel pasien negatif COVID-19 berdasarkan protokol Pemantapan Mutu Eksternal (PME) Laboratorium COVID-19 Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Hasil analisis nilai Ct menunjukkan bahwa nilai Ct gen HRP dan gen N dari kit Seasun tidak berbeda signifikan dengan gen N1, gen N2, dan gen HRP dari golden standard US CDC berdasarkan uji ANOVA satu arah (p > 0,05; CI = 95%). Uji diagnosis menunjukkan kit Seasun terdapat hasil negatif palsu pada sampel N00212. Kit Seasun memiliki tingkat sensitivitas analitik sebesar 95% dan spesifisitas analitik sebesar 100%. Kit Seasun memiliki nilai baku mutu berada pada rentang nilai yang disetujui dan direkomendasikan oleh WHO serta dapat digunakan untuk kit deteksi SARS-CoV-2 di Indonesia

---

Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) is an acute respiratory infectious disease characterized by dry cough, shortness of breath, fever, and Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). COVID-19 is caused by infection with the SARS-CoV-2 in the human respiratory tract. There were 3.287.727 confirmed cases of COVID-19 in Indonesia on July 28, 2021, with 47.791 new cases per day. The steps to slow the spread is to increase the detection rate of SARS-CoV-2 based on detection of the nucleic acid of the SARS-CoV-2. The Indonesian COVID-19 task force (Satgas COVID-19) has released a list of commercial kits allowed to detect genetic material for the SARS-CoV-2, one of them is the Seasun U-TOPTM COVID-19 kit. This study aims to determine the quality standard of the Seasun kit in detecting SARS-CoV-2 in Indonesia. The Seasun kit quality standard test was carried out by comparing the Cycle threshold (Ct) value of Seasun kit against the United States CDC golden standard kit and the Seasun kit diagnostic test using 20 samples of positive and 10 samples of negative COVID-19 patients based on the External Quality Assurance COVID-19 Laboratory protocol of the Ministry of Health of Republic of Indonesia. The results showed that the Ct values ​​of the HRP gene and the N gene from the Seasun kit were not significantly different from the N1 gene, N2 gene, and the HRP gene from the CDC golden standard based on ANOVA one-way (p > 0,05; CI = 95%). The diagnostic test showed that the Seasun kit had false-negative results in sample N00212 so that the Seasun kit had analytical sensitivity of 95% and analytical specificity of 100%. Seasun kit ​​approved and recommended by WHO to become a SARS-CoV-2 detection kit in Indonesia."

"Pandemi COVID-19 yang sedang berlangsung telah menjadi masalah global yang harus segera diselesaikan. Sistem deteksi yang sensitif dan responsif merupakan parameter yang sangat penting untuk menekan angka penyebaran SARS-CoV-2. Menurut WHO, real-time PCR berbasis probe merupakan standar emas untuk diagnosis COVID-19, namun berbiaya tinggi sehingga sulit untuk mendiagnosis dalam skala besar. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi sensitivitas dan kinerja uji RT-qPCR berbasis intercalating-dye dalam mendeteksi SARS-CoV-2 pada sampel manusia. Penelitian ini dilakukan dengan mengembangkan dan menguji RT-qPCR berbasis intercalating-dye dengan SYBR Green menggunakan dua primer yang direkomendasi WHO yaitu CCDC-N dan HKU-ORF-nsp14. Penelitian diawali dengan melakukan skrining primer dan dilakukan uji deteksi, uji spesifisitas, uji sensitivitas, pembuatan kurva linearitas untuk menentukan efisiensi, dan uji keterulangan menggunakan sampel SARS-CoV-2. Hasil uji keterulangan dari % CV intra-assay dan inter-assay dari pengujian RT-qPCR menggunakan primer CCDC-N secara berurutan adalah 0,74% dan 1,16%. Sedangkan, % CV intra-assay dan inter-assay dari pengujian RT-qPCR menggunakan primer HKU-ORF1b-nsp14 secara berurutan adalah 1,16% dan 1,69%. Nilai efisiensi RT-qPCR berbasis intercalating-dye menggunakan pasangan primer CCDC-N dan pasangan primer HKU-ORF1b-nsp14 masing-masing sebesar 93,73% dan 90,6%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa RT-qPCR menggunakan primer CCDC-N dan HKU-ORF-nsp14 baik dalam parameter spesifisitas, sensitivitas, efisiensi, dan keterulangan untuk digunakan pada deteksi SARS-CoV-2 dan performa RT-qPCR berbasis intercalating-dye baik untuk menjadi alternatif deteksi SARS-CoV-2.

---

A sensitive and responsive detection system is an important parameter for the success of minimizing the spread of SARS-CoV-2. According to WHO, probe-based PCR is the gold standard for the diagnosis of COVID-19. However, to detect using probe-based PCR is high-cost and making it difficult to diagnose on a large scale. The aim of this study is to test the performance of intercalating dye-based RT-qPCR for detecting SARS-CoV-2 in human samples. This research was conducted by developing RT-qPCR assays with SYBR Green using two primers, namely CCDC-N and HKU-ORF-nsp14. The study was carried out with primer screening, specificity tests, sensitivity tests, repeatability tests using SARS-CoV-2 samples, and linearity curve test to determine efficiency. The repeatability test results of intra-assay and inter-assay CV % from RT-qPCR test using CCDC-N were 0.74% and 1.16%, respectively. Meanwhile, the % of intra-assay and inter-assay CV from RT-qPCR assay using HKU-ORF1b-nsp14 were 1.16% and 1.69%, respectively. The efficiency values of RT-qPCR using the CCDC-N primer pair and the HKU-ORF1b-nsp14 primer pair were 93.73% and 90.6%, respectively. The results showed that intercalating dye-based RT-qPCR acceptable in the parameters of specificity, sensitivity, efficiency, and repeatability and satisfactory for being alternative detection for SARS-CoV-2. "

"Pandemi COVID-19 bermula akibat infeksi virus SARS-CoV-2. Deteksi SARS-CoV-2 secara standar dilakukan dengan metode Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR) yang mayoritas menarget gen N dan RdRp. Produk lokal untuk mendeteksi SARS-CoV-2 belum banyak tersedia dengan gen target baru berupa N2, RdRp, dan Orf1b. Tujuan dari penelitian ini adalah mengoptimasi reaksi multiplex RT-qPCR dengan dua pasang set primer yang masing-masing menarget gen N dan RdRp dengan gen RPP30 sebagai kontrol internal pengujian. Penelitian dilakukan dengan metode berupa pembuatan kultur Escherichia coli, ekstraksi plasmid Escherichia coli, ekstraksi RNA sel HepG2, PCR, RT-PCR, RT-qPCR, dan elektroforesis. Hasil penelitian di langkah awal memberikan keberhasilan ekstraksi plasmid dan RNA. Proses PCR terhadap plasmid yang menarget gen N dan RdRp dan RT-PCR terhadap RNA yang menarget gen RPP30 memberikan kemunculan pita berukutan mendekati 100 bp setelah dielektroforesis. RT-qPCR yang dilakukan menggunakan dua pasang set primer memberikan hasil positif dengan kemunculan grafik logaritmik pada plot RT-qPCR pada masing-masing primer. Hasil penelitian dapat disimpulkan berupa RT-qPCR telah berhasil dilakukan pada dua pasang set primer yang menarget gen N dan RdRp dengan kontrol internal berupa gen RPP30.

---

COVID-19 pandemic originated in December 2020 due to SARS-CoV-2 virus infection. Standardized SARS-CoV-2 detection is examined by Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR) with N and RdRp genes as the main target. Local SARS-CoV-2 detection product is not much available with only N2, RdRp, and Orf1b as gene target. This research aims to optimize multiplex RT-qPCR with two pairs of primer set targeting N and RdRp genes with RPP30 gene as internal control. The research is done by several methods: Escherichia coli culture production and plasmid extraction, HepG2 cell RNA extraction, PCR, RT-PCR, RT-qPCR, and electrophoresis. The result of the earlier steps is successful plasmid and RNA extraction. PCR on plasmid targeting N and RdRp genes and RT-PCR on RNA targeting RPP30 gene giving results of bands appearance with size around 100 bp after electrophoresis is done. RT-qPCR of two pairs of primer set generally giving positive results with appearance of logarithmic graph on RT-qPCR plots. Research results could be concluded with RT-qPCR are done successfully using two sets of primer that targeting N and RdRp genes with RPP30 gene as internal control."

"RT-qPCR (Real-Time Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction) berbasis SYBR Green, merupakan metode alternatif yang dapat digunakan untuk pendeteksian SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), selain berbasis TaqMan. Pada penelitian ini, primer yang dirancang menargetkan gen RdRP (Ribonucleic Acid/RNA-Dependent Ribonucleic Acid Polymerase) berdasarkan sekuens SARS-CoV-2 di Indonesia. Efisiensi dari metode yang dilakukan diketahui sebesar 97,82% dan limit of detection-nya adalah sampel dengan CT (cycle threshold) sebesar 41,25. Pada hasil uji spesifisitas, dua puluh sampel RNA positif SARS-CoV-2 terdeteksi positif dan delapan dari sepuluh sampel RNA negatif SARS-CoV-2 terdeteksi negatif. Dua sampel negatif yang terdeteksi positif karena terdeteksinya primer-dimer. Metode memenuhi kriteria presisi dengan hasil koefisien variasi pada intra-assay kurang dari 10% dan pada inter-assay kurang dari 15%. Sebagai langkah awal pengembangan deteksi kuantitatif, pada penelitian ini juga dilakukan percobaan penumbuhan transforman menggunakan sel kompeten One Shot® TOP10 dan One Shot® BL21(DE3) dengan plasmid kontrol DNA (deoxyribonucleic acid) pUC19 sebagai pemastian efisiensi sel kompeten yang dapat digunakan untuk penumbuhan kloning transforman gen RdRP SARS-CoV-2. Jumlah koloni bakteri yang berhasil tumbuh dari dua jenis sel kompeten tersebut tidak sesuai dengan ekspektasi panduan dari produsen. Selain itu, pada penelitian ini telah berhasil didapatkan fragmen gen target RdRP untuk kloning dengan PCR konvensional.

---

SYBR Green-based RT-qPCR (Real-Time Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction) is an alternative method to detect SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), besides the TaqMan-based. In this study, the primers were designed to target the RdRP (Ribonucleic Acid/RNA-Dependent Ribonucleic Acid Polymerase) gene based on a SARS-CoV-2 sequence in Indonesia. The method's efficiency is known to be 97,82% and the limit of detection is a sample with a CT (cycle threshold) of 41,25. At the specificity test results, all twenty positive RNA samples of SARS-CoV-2 were detected as positive. Eight from ten negative RNA samples of SARS-CoV-2 were detected as negative, the remaining detected primer-dimer. The method meets the criteria of precision with the results of the coefficient of variation was less than 10% and 15% for intra-assay and inter-assay, respectively. As an initial step in developing quantitative detection, in this study, the efficiency of One Shot® TOP10 and One Shot® BL21(DE3) competent cells were confirmed using a DNA (deoxyribonucleic acid) control plasmid pUC19. Both types of competent cells do not meet the expectation based on the manufacturer. In addition, for cloning, the RdRP gene target fragment was successfully obtained by conventional PCR."