Hasil Pencarian  ::  Simpan CSV :: Kembali

"Bromelain merupakan kelompok enzim protease yang terus dikembangkan untuk dimanfaatkan dalam bidang medis sebagai agen antiplatelet, antiinflamasi, antioksidan, dan antikanker. Oleh sebab itu, diperlukan bentuk sediaan enzim terkontrol yang dapat mempertahankan aktivitas enzim dalam lambung sehingga dapat meningkatkan absorbsi saat mencapai usus. Penelitian ini bertujuan untuk mempertahankan aktivitas antiplatelet bromelain hasil isolasi bonggol buah nanas dengan mengenkapsulasinya pada kitosan terikat silang glutaraldehid. Bromelin yang diisolasi dimurnikan melalui fraksinasi dengan garam amonium sulfat dan dialisis. Aktivitas spesifik dari tiap fraksi menunjukkan adanya peningkatan, dimulai dari enzim kasar (71,10 U/mg), fraksi ammonium sulfat(151,70 U/mg) dan dialisis (226,8 U/mg). Hasil dialisis selanjutnya dienkapsulasi secara post loading dalam mikrosfer kitosan terikat silang glutaraldehid 2,5% (v/v), dengan derajat ikat silang sebesar 94,87% dan rasio swelling sebesar 41,45% pada pH 1,2; 20,97% pada pH 7,4; dan efisiensi sebesar 84,75%. Hasil uji disolusi menunjukan tingkat pelepasan bromelain yang relatif lebih kecil di cairan lambung artifisial (13,43%) dibandingkan lingkungan pH usus (60,52%). Aktivitas proteolitik dari bromelain dapat dipertahankan hingga mencapai 0,35 U/mL pada lingkungan pH usus artifisial.

---

Bromelain is a group of protease enzymes that continue to be developed to be used in the medical field as an antiplatelet agent, anti-inflammatory, antioxidant, and anticancer. Therefore, a controlled enzyme dosage form is needed that can maintain enzyme activity in the stomach so that it can increase absorption when it reaches the intestine. The aim of this study was to maintain the antiplatelet bromelain activity resulting from pineapple hump isolation by encapsulating it with glutaraldehyde cross-linked chitosan. Isolated bromelin was purified by fractionation with ammonium sulfate salt and dialysis. Specific activities of each fraction showed an increase, starting from crude enzymes (71.10 U/mg), ammonium sulfate fraction (151.70 U/mg) and dialysis (226.8 U/mg). The dialysis results were then encapsulated post loading in 2.5% (v/v) glutaraldehyde crosslinked chitosan microspheres, with crosslinking degrees of 94.87% and swelling ratio of 41.45% at pH 1.2; 20.79% at pH 7.4; and efficiency of 84.75%. The dissolution test results showed a relatively smaller release rate of bromelain in artificial gastric fluid (13.43%) compared to the intestinal pH environment (60.52%). The proteolytic activity of bromelain can be maintained up to 0.35 U/mL in an artificial intestinal pH environment."

"ABSTRAKPenelitian ini bertujuan untuk menyalut bromelain dari bonggol nanas hasil pemurnian ke dalam mikrosfer kitosan terikat silang glutaraldehid agar masih memiliki aktivitas ketika mencapai usus. Enzim kasar dimurnikan pertama kali menggunakan metode presipitasi ammonium sulfat, diikuti dengan dialisis. Pemurnian enzim kasar dengan metode faksinasi ammonium sulfat dan proses dialisis dapat meningkatkan kemurnian enzim. Aktivitas tertinggi bromelain dari fraksinasi ammonium sulfat diperoleh sebesar 18,78 U/mg dengan tingkat kemurnian 9.45 kali lipat dibandingkan dengan enzim kasar. Sementara itu, fraksi bromelain dari dialisis memiliki aktivitas spesifik 294,44 U/mg dengan tingkat kemurnian 15,68 kali dibandingkat dengan ekstrak kasar. Bromelain murni dilapisi dengan kitosan termodifikasi menggunakan metode post loading, kemudian dievaluasi dalam cairan lambung pH 1,2 dan lingkungan usus pH 7,4 artifisial. Mikrosfer yang disintesis memiliki derajat ikat silang 94,53 dan rasio swelling 53,60 untuk penentuan sifat fisik. Enkapsulasi bromelain hasil pemurnian dengan metode post loading ke dalam mikrosfer terikat silang glutaraldehid 2.5 menghasilkan efisiensi sebesar 87,14 . Hasil uji disolusi menggunakan disolusi metode keranjang menunjukan tingkat pelepasan bromelain di lingkungan cairan lambung artifisial adalah 9,35 selama dua jam dan pada lingkungan usus artifisial adalah 79,92 selama delapan jam. Hasil penelitian ini menunjukan bahwa mikrosfer kitosan cukup baik sebagai penyalut bromelain untuk sediaan lepas lambat.

---

ABSTRACTThe aim of this study is to coat bromelain from extract pineapple rsquo s core into chitosan microsphere crosslinked by glutaraldehyde to maintain its activity until it reaches the intestines. The crude enzyme was first purified by ammonium sulfate precipitation method, followed by the dialysis. Purification of crude enzymes by the ammonium sulfate fractionation method and the dialysis process can increase the purity of bromelain. The highest specific activity of bromelain from the ammonium sulfate fraction was obtained at 18.78 U mg with a purity level of 9.45 fold compared to the crude enzyme. Meanwhile, the bromelain fraction of the dialysis has a specific activity of 294.44 U mg with a purity level of 15.68 fold compared to crude extract. The purified bromelain was coated with modified chitosan using the post loading method, then evaluated in gastric fluid pH 1.2 and intestinal environment pH 7.4 artificialy. Synthesized microspheres has crosslinking degree of 94.53 and swelling ratio of 53.60 for determination of physical properties. Coating bromelain using the post loading method in a 2.50 glutaraldehyde crosslinked microsphere showed an efficiency of 87.14 . The dissolution test results using basket method of dissolution showed the release rate of bromelain in artificial gastric fluid is 9,35 for two hours and in artificial intestinal environment is 79,92 for eight hours. The results of this study indicate that chitosan coated microspheres are good enough as bromelain coatings for slow release matrices."

"ABSTRAKPenelitian ini bertujuan untuk enkapsulasi bromelain hasil isolasi dalam hidogel kitosan terikat silang glutaraldehid agar masih memiliki aktivitas ketika mencapai usus. Isolasi bromelain dilakukan dengan beberapa pemurnian seperti fraksinasi dengan garam ammonium sulfat, dialisis dan kromatografi kolom penukar ion menggunakan matriks DEAE-Selulosa. Fraksi bromelain yang diperoleh dari setiap tahap pemurnian menunjukkan adanya peningkatan aktivitas spesifik, secara berurutan dari enzim kasar, fraksi amonium sulfat, fraksi dialisis dan fraksi kromatografi DEAE-Selulosa fraksi nomor 58-71 sebesar 24 U/mg; 122 U/mg; 125 U/mg; dan 195 U/mg. Sebagian fraksi bromelain hasil dialisis dienkapsulasi dengan metode post loading untuk diuji secara in vitro pada cairan pH lambung dan lingkungan pH usus artifisial. Enkapsulasi metode post loading menghasilkan efisiensi sebesar 96 . Interaksi yang terjadi antara bromelain dengan kitosan hanya interaksi fisik berupa interaksi hidrogen. Hasil uji disolusi menunjukan tingkat pelepasan bromelain yang relatif lebih besar di cairan lambung artifisial 37 dibandingkan lingkungan pH usus 10 . Namun aktivitas proteolitik dari bromelain dapat dipertahankan hingga mencapai 0,17 U/mL pada lingkungan pH usus artifisial.

---

ABSTRACTThe aim of this study is to encapsulate bromelain into chitosan crosslinked by glutaraldehyde hydrogel to maintain its activity until it reaches the intestines. Bromelain isolation step was done by purification through ammonium sulphate precipitation, dialysis and ionic exchange chromatography using DEAE cellulose matrix. The fraction of bromelain obtained from each purification step showed an increase in specific activity, sequentially from enzyme crude, ammonium sulfate bromelain fraction, dialysis fraction and DEAE chromatography fraction fraction number 58 71 of 23 U mg 122 U mg 125 U mg and 195 U mg. Furthermore, bromelain fraction resulted from dialysis step was encapsulated with post loading method for dissolution profile test in artificial gastric fluid and artificial intestinal environment. The efficiency of encapsulation bromelain with post loading method is 96. The interaction between hydrogel and bromelain is only physical interaction, that is a hydrogen interaction. In addition, dissolution bromelain in artificial gastric fluid is higher 37 than artificial intestinal environment 10. On the other hand, proteolytic activity of bromelain can be maintained up to 0,17 U mL until artificial intestinal environment."

"ABSTRAKPenelitian ini bertujuan untuk mempertahankan aktivitas antiplatelet bromelain hasil isolasi bonggol nanas dari degradasi oleh cairan lambung dengan mengenkapsulasinya pada alginat-guar gum terikat silang glutaraldehid. Isolasi bromelain diikuti oleh tahap pemurnian yang meliputi fraksinasi dengan ammonium sulfat dan dialisis. Aktivitas spesifik dari tiap fraksi menunjukkan adanya peningkatan, dimulai dari enzim kasar 20,11 U/mg , fraksi ammonium sulfat 190,64 U/mg , dan dialisis 229,77 U/mg . Hasil dialisis kemudian dienkapsulasi secara in situ loading dalam hidrogel alginat-guar gum dengan konsentrasi glutaraldehid 1.25 v/v , dengan rasio swelling sebesar 234,37 pada pH 1,2; 1375.91 pada pH 7,4; dan efisiensi sebesar 60,42 . Hasil uji disolusi memperlihatkan pelepasan maksimal bromelain yang relatif tinggi pada lingkungan usus artifisial 1,79 mg/l daripada cairan lambung artifisial 0,13 mg/l , dengan aktivitas proteolitik maksimal berturut ndash; turut sebesar 1,2 U/mL dan 0,11 U/mL. Uji antiplatelet memperlihatkan persen inhibisi yang baik terhadap enzim hasil dialisis 50,6 dan larutan hasil disolusi 34,86.

---

ABSTRACTThe aim of this study is to maintain the antiplatelet activity of pineapple core bromelain from degradation in gastric fluid by encapsulating the enzyme in alginate guar gum crosslinked with glutaraldehyde. Bromelain isolation is followed by purification process such as ammonium sulphate precipitation and dialysis. The specific activity obtained showed an enhancement started for crude enzyme 20,11 U mg , ammonium sulphate fraction 190,64 U mg , and dialysis fraction 229,77 U mg . Dialysis fraction is encapsulated by in situ loading method in alginate guar gum hydrogel with 1,25 v v glutaraldehyde concentration. The swelling ratio of the hydrogel is 234,37 in acidity of 1,2 1375,91 in acidity of 7,4 and the encapsulation efficiency amount is 60,42 . In addition, maximum concentration of bromelain released in dissolution test is higher in artificial intestinal environment 1,79 mg l than in artificial gastric fluid 0,1378 mg l , with maximum proteolytic activity of 1,2 U mL dan 0,11 U mL, respectively. In vitro study of antiplatelet activity showed a good inhibition for both dialysis fraction 50,6 and dissolution product 34,86."

"Penelitian ini bertujuan untuk mempertahankan aktivitas antiplatelet bromelain sebagai hasil isolasi dari degradasi di lingkungan lambung dengan merangkumnya dalam matriks hidrogel gum chitosan-guar yang dihubungkan silang dengan glutaraldehyde untuk memastikan pelepasan obat yang ditargetkan pada lingkungan usus. Isolasi bromelain enzim dari batang nanas dilakukan melalui beberapa langkah yaitu ekstraksi, fraksinasi dengan ammonium sulfat, dan dialisis. Aktivitas spesifik masing-masing fraksi menunjukkan peningkatan, dari enzim kasar (43,73 U/mg), fraksinasi dengan ammonium sulfat (369,01 U/mg), dan dialisis (437,89 U/mg). Enzim bromelain yang dihasilkan dari dialisis kemudian dienkapsulasi dalam matriks hidrogel dengan cara post-loading untuk diuji untuk disolusi in vitro di lingkungan buatan dan usus. Hidrogel yang digunakan adalah chitosan-guar gum dengan 3% (v/v) konsentrasi glutaraldehyde, dengan rasio pembengkakan masing-masing 75,83% dan 68,39% pada pH 1,2 dan 7,4. Konsentrasi bromelain yang diisolasi bervariasi pada setiap proses enkapsulasi yang masing-masing 20 mg/L, 40 mg/L, dan 60 mg/L sehingga efisiensi enkapsulasi optimal sebesar 93,72% diperoleh pada 20 mg / L. Hasil uji disolusi menunjukkan pelepasan bromelain maksimum yang relatif tinggi di lingkungan usus buatan (73,53%) dibandingkan dengan lingkungan stomatch (19,11%) dengan aktivitas proteolitik maksimum masing-masing 0,43 U/mL dan 0,18 U/mL di usus buatan dan lingkungan lambung. Hasil disolusi kemudian dimasukkan ke dalam model matematika persamaan zeroth, orde pertama, Higuchi, dan persamaan Korsmeyer-Peppas untuk menentukan mekanisme disolusi obat dengan difusi Fickian. Uji antiplatelet menunjukkan persentase penghambatan yang baik terhadap enzim dialisis (46,60%) dan larutan disolusi (41,31%).

---

This study aims to maintain the antiplatelet activity of bromelain as a result of isolation from degradation in the gastric environment by encapsulating it in a chitosan-guar gum hydrogel matrix that is crosslinked with glutaraldehyde to ensure the release of drugs targeted at the intestinal environment. Isolation of bromelain enzymes from pineapple stems is done through several steps, namely extraction, fractionation with ammonium sulfate, and dialysis. The specific activity of each fraction showed an increase, from crude enzymes (43.73 U/mg), fractionation with ammonium sulfate (369.01 U/mg), and dialysis (437.89 U/mg). Bromelain enzymes produced from dialysis are then encapsulated in the hydrogel matrix by post-loading to be tested for in vitro dissolution in artificial and intestinal environments. The hydrogel used was chitosan-guar gum with 3% (v/v) glutaraldehyde concentration, with swelling ratios of 75.83% and 68.39% respectively at pH 1.2 and 7.4. The concentration of bromelain isolated varies in each encapsulation process, each of which is 20 mg/L, 40 mg/L, and 60 mg/L so that the optimal encapsulation efficiency of 93.72% is obtained at 20 mg/L. Dissolution test results show the release of bromelain relatively high maximum in the artificial intestinal environment (73.53%) compared to the stomatch environment (19.11%) with maximum proteolytic activity respectively 0.43 U/mL and 0.18 U/mL in the artificial intestine and gastric environment. Dissolution results are then incorporated into the mathematical model of the zeroth, first order, Higuchi, and Korsmeyer-Peppas equations to determine the mechanism of drug dissolution by Fickian diffusion. Antiplatelet test showed a good percentage of inhibition of dialysis enzymes (46.60%) and dissolution solution (41.31%)."

"ABSTRAKPenelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan memurnikan enzim bromelain dari bonggol nanas (Ananas comosus [L] Merr.) disertai pengujian aktivitasnya sebagai agen antiplatelet. Tahap pemurnian dimulai dari isolasi, fraksinasi bertingkat menggunakan etanol, kromatografi penukar ion dengan DEAE-Selulosa, dan kromatografi filtrasi gel dengan Sephadex G-50. Tiap tahap pemurnian menghasilkan peningkatan aktivitas spesifik pada fraksi enzim, mulai dari ekstrak kasar berturut-turut sebesar 0,0052 Unit/mg; 4,6480 Unit/mg; 9,0306 Unit/mg; dan 11,8421 Unit/mg. Fraksi enzim yang telah melewati tahap kromatografi penukar ion dan filtrasi gel menunjukkan tingkat kemurnian tertinggi, yaitu 2277 kali dibanding ekstrak kasarnya. Hasil uji aktivitas antiplatelet terhadap seluruh fraksi enzim membuktikan bahwa bromelain berpengaruh pada proses agregasi platelet. Fraksi enzim hasil pemurnian pun menunjukkan aktivitas terbesar sebagai agen antiplatelet, yaitu memberikan nilai persentase agregasi platelet sebesar 64,04% dan nilai persentase inhibisi sebesar 31,25%. Uji stabilitas enzim menunjukkan bahwa enzim bromelain dari bonggol nanas mengalami penurunan aktivitas proteolitik sebesar 0,2315 Unit/mL per hari selama proses penyimpanan, dan dapat mengalami inaktivasi pada pemanasan suhu 80°C.

---

ABSTRAKThis study aimed to isolate and purify the bromelain enzyme from pineapple core (Ananas comosus [L] Merr.), accompanied by testing that activity as a antiplatelet agents. Purification stages starting from the isolation, fractionation storied using ethanol, ion exchange chromatography with DEAE-Cellulose and gel filtration chromatography with Sephadex G-50. Each stages of purification succeed increasing value of specific activity in an enzyme fraction, start from crude extract enzyme, respectively: 0.0052 Unit/mg; 4.6480 Unit/mg; 9.0306 Unit/mg; and 11.8421 Unit/mg. Enzyme fractions have passed the stage of ion chromatography and gel filtration show the highest level of purify (2277 fold compared to the crude extract). The results of antiplatelet activity on all factions proved that the enzyme bromelain giving effect on platelet aggregation process. The fraction was purified also show greatest activity as an antiplatelet agent, with the percentage of platelet aggregation values of 64.04% and a percentage inhibition value of 31.25%. Enzyme stability test showed that the enzyme bromelain from pineapple core decreased proteolytic activity of 0.2315 units / mL per day during the storage process, and can be inactivated on heating temperature of 80°C."

"ABSTRACTSeiring dengan tingginya produksi nanas di indonesia, jumlah limbah nanas yang dihasilkan juga semakin tinggi, salah satunya adalah bonggol nanas dengan enzim proteolitik yang disebut `bromelain` dalam jumlah besar. Bromelain memiliki banyak manfaat, terutama karena kemanjurannya dalam berbagai pengobatan penyakit, seperti agregasi trombosit, peradangan yang terkait dengan infeksi, sinusitis, osteoarthritis dan kanker. Namun, untuk penggunaan oral, bromelain dapat terdegradasi oleh adanya protease dan kondisi pH asam di lambung, sehingga bromelain akan kehilangan aktivitasnya (terdenaturasi). Dalam penelitian ini, bromelain yang diisolasi dan dimurnikan dari bonggol nanas kemudian disalut dalam mikrokapsul alginat-kitosan sebagai media distribusi obat sehingga bromelain dapat mencapai usus tanpa terdenaturasi di lambung. Pemurnian menggunakan 20%-50% amonium sulfat menghasilkan bromelain dengan aktivitas spesifik 5,44 U/mg dan kemurnian 2,80 kali dibandingkan dengan enzim kasar. Enzim yang dimurnikan kemudian didialisis dan menghasilkan 8,27 U/ mg dengan tingkat kemurnian 4,30 kali. Uji disolusi bromelain yang disalut dalam mikrokapsul alginat menghasilkan efisiensi 76,99% yang dilarutkan pada pH 1,2 sebanyak 13,53% dan pada pH 7,4 sebesar 80,09%, sedangkan pada mikrokapsul alginat yang dilapisi kitosan, efisiensi diperoleh sebesar 86,40% dengan hasil disolusi pada pH 1,2 dan 7,4 masing-masing adalah 8,59% dan 77,35%.

---

ABSTRACTAlong with the large number of pineapple products in indonesia, the amount of pineapple waste produced is also high, one of which is pineapple cores with large amount of proteolytic enzyme called `bromelain`. Bromelain has many benefits, particularly because of its efficacy in various treatments of diseases, such as platelet agregation, inflammation associated with infections, sinusitis, osteoarthritis and cancer. However, for oral use, bromelain may be degraded by the presence of proteases and the condition of acidic pH in the stomach, so that bromelain will lose its activity. In this study, the isolated and purified bromelain from pineapple cores was subsequently encapsulated in alginate-chitosan microcapsules as drug delivery medium so that bromelain could reach the intestine without degradation in the stomach. The purification using 20%-50% ammonium sulfate obtained bromelain with specific activity of 5.44 U/mg and purity of 2.80 times. The purified enzyme was subsequently  dialyzed and yielded of 8.27 U/mg with the purity level of 4.30 times. The dissolution test of bromelain encapsulated in alginate microcapsules resulted in efficiency of 76.99% which  dissoluted at pH 1.2 as much as 13.53% and at pH 7.4 of 80.09%, while in chitosan-coated alginate microcapsules, efficiency was obtained for 86.40% with dissolution result at pH 1.2 and 7.4 were 8.59% and 77.35% respectively."

"Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan memurnikan enzim bromelain dari bonggol nanas (Ananas comosus) dengan metode pengendapan fraksionasi menggunakan garam ammonium sulfat, diikuti dengan dialisis dan kromatografi kolom gel filtrasi. Fraksi termurni diuji aktifitas antiplatelet dan ditentukan nilai IC50. Tahap ekstraksi menghasilkan enzim kasar dengan aktifitas spesifik 0.0059 U/mg. Tahap fraksionasi pengendapan, menghasilkan fraksi enzim dengan aktifitas spesifik tertinggi pada fraksi 50 ? 80% (ke 3) yaitu sebesar 8.2243 U/mg. Fraksi 3 setelah didialisis menghasil aktifitas spesifik sebesar 8.3118 U/mg. Proses kromatografi menggunakan Sephadex G-50 menghasil fraksi enzim dengan nilai aktifitas spesifik sebesar 8.5177 U/mg pada fraksi pertama (Kr 1). Fraksi Kr 1 diuji aktifitas spesifiknya dengan metode Born dimodifikasi dan menghasilkan persen aggregasi sebesar 70.59% dan persen inhibisi sebesar 24.34%. Nilai IC50 diperoleh sebesar 57.4040 mL/mL PRP.

---

This study aim to isolate and purify bromelain enzyme from pineapple core (Ananas Comosus) through fractional precipitation by ammonium sulfate, followed by dialysis and column chromatography gel filtration. The purest enzyme fraction is then measured it?s antiplatelet activity and IC50. Crude extract obtain through extraction gives 0.0059 U/mg specific activity. Fraction 3 from fractional precipitation gives the highest specific activity with 8.2243 U/mg and range from 50% to 80%. After dialysis, specific activity increase to 8.3118 U/mg and increased again through chromatography process to 8.5177 U/mg on fraction Kr 1. Antiplatelet activity of Kr 1 is then tested, and has 70.59 % aggregation, 24.34% inhibition and an IC50 value of 57.4040 mL/mL PRP."

"ABSTRAKBromelain merupakan nama umum enzim proteolitik yang terdapat pada jaringan tanaman nanas suku Bromeliaceae. Pada penelitian ini, isolasi dan pemurnian bromelain dari bonggol nanas Bogor Ananas comosus [L.] Merr dilakukan dengan pengendapan amonium sulfat dan kromatografi kolom penukar ion menggunakan DEAE-Selulosa. Aktivitas enzim dievaluasi dengan menggunakan kasein sebagai substrat. Aktivitas spesifik tertinggi fraksi bromelain hasil fraksinasi amonium sulfat terdapat pada tingkat kejenuhan 20-80 , yaitu sebesar 51,75 U/mg dengan tingkat kemurnian 24 kali ekstrak kasarnya. Pemurnian dengan Diethylaminoethyl-Selulosa DEAE-Selulosa meningkatkan aktivitas spesifik menjadi 60,57 U/mg dengan tingkat kemurnian 28 kali ekstrak kasarnya. Reaksi hidrolisis oleh enzim hasil pemurnian dengan variasi konsentrasi substrat kasein dilakukan pada kondisi optimum pH 7 dan 370C. Dari reaksi tersebut didapatkan nilai konstanta Michaelis-Menten Km dan kecepatan maksimum reaksi vmax berturut-turut sebesar 0,61 w/v dan 6,22 U/min. Uji in vitro aktivitas bromelain sebagai antiplatelet terhadap Platelet Rich Plasma PRP manusia menunjukkan hasil positif untuk seluruh fraksi, dengan persen inhibisi tertinggi pada fraksi DEAE-Selulosa sebesar 54,16 dan nilai IC50 sebesar 31,37 ?L/mL.

---

ABSTRACTBromelain is a mixture of the proteolitic enzymes found in pineapple plant tissues within the Bromeliaceae family. In this research, the isolation and purification of bromelain from Nanas Bogor Ananas comosus L. Merr core were carried using ammonium sulphate precipitation and Diethylaminoethy Cellulose DEAE Cellulose chromatography. The enzyme activities were evaluated using casein as substrate. The highest specific activity of bromelain from ammonium sulphate fractination was obtained at 51,75 U mg in the range of 20 80 saturation with a purity level of enzyme is 24 times from its crude extract. Later on, the purification with DEAE Cellulose resulted in increasing the specific activity to 60,57 U mg with a purity level of enzyme is 28 times from its crude extract. Hydrolysis of various casein concentration with purified bromelain was carried out at optimum reaction condition of pH 7,0 and 370C. The results obtained revealed the Km and Vmax value of 0,61 w v and 6,22 U min respectively. In vitro study of antiplatelet agent activity using human Platelet Rich Plasma PRP revealed that all bromelain fractions show activity as an antiplatelet agent. The highest inhibition was shown by DEAE Cellulose fraction of 54,16 with IC50 of 31,37 L mL."

"ABSTRAKPenelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan memurnikan bromelain yang diekstrak dari bagian bonggol nanas Ananas comosus . Proses pemurnian bromelain diawali dengan pengendapan bertingkat menggunakan amonium sulfat, diikuti dengan proses dialisis dan dilanjutkan dengan tahap pemurnian lanjutan menggunakan metode kromatografi kolom penukar ion DEAE-Sepharosa dan CM-Sephadex C-50. Fraksi bromelain yang diperoleh dari tiap tahapan pemurnian menunjukkan peningkatan aktivitas spesifik dibandingkan dengan ekstrak enzim kasar. Aktivitas spesifik tertinggi ekstrak bromelain kasar hasil fraksinasi dengan amonium sulfat terdapat pada tingkat kejenuhan 20-50 fraksi 2 sebesar 260,042 U/mg dengan tingkat kemurnian 2,548 kali ekstrak enzim kasarnya. Proses dialisis meningkatkan aktivitas spesifik menjadi 381,287 U/mg dengan tingkat kemurnian 3,737 kali ekstrak enzim kasarnya. Pemurnian lanjutan dengan kromatografi kolom penukar ion Dietilaminoetil-Sepharosa DEAE-Sepharosa dan CM-Sephadex C-50 menunjukkan adanya peningkatan aktivitas spesifik dan tingkat kemurnian, secara berurutan menjadi 500 U/mg dengan tingkat kemurnian 4,901 kali ekstrak enzim kasarnya dan dan 729,167 U/mg dengan tingkat kemurnian 7,150 kali ekstrak enzim kasarnya. Nilai Km dan Vmax bromelain pada substrat kasein dan azocasein berturut-turut sebesar 0,94 w/v ; 0,07 U/min dan 0,87 w/v ; 0,05 U/menit. Jenis inhibisi yang terjadi antara kompleks enzim bromelain-kasein terhadap EDTA adalah inhibisi kompetitif Km meningkat dan Vmax tetap . Jenis inhibisi yang terjadi antara kompleks enzim bromelain-kasein terhadap PCMB adalah mix-inhibisi Km meningkat dan Vmax menurun . Fraksi bromelain dengan aktivitas antiplatelet tertinggi adalah fraksi termurni hasil pemurnian menggunakan kromatografi kolom penukar ion CM-Sephadex C-50 dengan persen agregasi platelet sebesar 20,892 dan persen inhibisi sebesar 77,994 . Nilai IC50 untuk fraksi bromelain paling murni dengan aktivitas spesifik 729,167 U/mg diperoleh sebesar 6,461 ? L/mL.

---

ABSTRACTThe aim of this research was to isolate and purify bromelain from core extract of pineapple Ananas comosus through fractionation using ammonium sulfate followed by dialysis and then purification using ion exchange column chromatography DEAE Sepharose and CM Sephadex C 50. The fraction of bromelain obtained from each purification step showed an increase in specific activity compared to crude extract. Fractionation of crude enzyme bromelain with ammonium sulfate produces highest specific activity on ammonium sulfate 20 50 fraction fraction 2 260.042 U mg with purify level 2.548 fold compared to crude extract. After dialysis, the bromelain fraction showed an increase in specific activity 381.287 U mg with purify level 3.737 fold compared to crude extract. The bromelain fraction after purification by using ion exchange column chromatography DEAE sepharose and CM Sephadex C 50 showed an increase in specific activity, sequentially 500 U mg with purify level 4.901 fold compared to crude extract and 729.167 U mg with purify level 7.150 fold compared to crude extract. Km and Vmax bromelain for casein and azocasein substrate 0,94 w v 0,07 U min and 0,87 w v 0,05 U menit respectively. In addition, bromelain fraction was inhibited competitively with EDTA and mix inhibition was observed in the presence of PCMB. In vitro study of antiplatelet agent activity using human Platelet Rich Plasma PRP revealed that all bromelain fractions show activity as an antiplatelet agent. The highest inhibition was shown by CM Sephadex C 50 fraction of 77,994 . with IC50 of 6,461 L mL."